猪肠外致病性大肠埃希氏菌（Extraintestinal pathogenic Escherichia coli,Ex PEC）是一种定植于肠道外组织中的人畜共患病原菌,常与其它病原混合感染猪群。由于猪源Ex PEC具有多重耐药性,导致抗菌治疗日益困难,病猪死亡率较高,严重制约了养猪业的健康发展,也给兽医公共卫生带来潜在危险。形成生物被膜是猪源Ex PEC的重要耐药机制之一,寻找有效抑制或清除生物被膜的药物,成为抗菌感染研究中的关注热点。已有研究表明黄芩的有效成分黄芩苷对变形链球菌、铜绿假单胞菌和肠内大肠埃希氏菌的生物被膜均具有抑制或清除作用,但对猪源Ex PEC生物被膜的影响尚不清楚。对此,本论文以自行分离的三株猪源Ex PEC为研究对象,在明晰分离株的生物被膜形成特性的基础上,探讨黄芩苷对不同阶段生物被膜的基质量、膜内菌代谢活性、膜结构以及成膜相关基因表达的影响。主要研究内容与结果总结如下:1)猪源Ex PEC分离株的生物被膜形成特性分析。论文中采用微孔板结晶紫染色法结合正交实验优化分离株的最佳成膜条件。在最佳成膜条件下检查分离株的成膜能力、动态形成过程以及生物被膜的显微结构。结果显示:（1）SE-1分离株的最佳成膜条件为将OD₆₀₀为0.5的菌液接种TSB培养基,37℃培养24 h;SE-2分离株的最佳成膜条件是将OD₆₀₀为0.3的菌液接种营养肉汤,34℃培养24 h;SE-3分离株的最佳成膜条件则为将OD₆₀₀为0.5的菌液接种至BHI培养基,34℃培养36 h。（2）各分离株均具有很强的成膜能力,但进入黏附、聚集和成熟阶段的时间不同。（3）SE-1分离株可形成片状结构生物被膜,而SE-2和SE-3分离株形成的是多层结构生物被膜。结果表明,尽管各分离株均具有很强的成膜能力,但其成膜最佳条件、动态形成过程及生物被膜结构并不完全相同。2)黄芩苷对猪源Ex PEC分离株生物被膜形成的影响。论文中采用微孔板结晶紫染色法、微孔板TTC染色法和扫描电镜检查黄芩苷对各分离株生物被膜形成的影响。结果显示,（1）与处理前相比,各分离株经不同浓度黄芩苷处理后,其黏附与聚集阶段的生物被膜基质量均显著减少（P<0.05或0.01）,且以1/2MIC浓度黄芩苷的抑制作用最好。（2）与处理前相比,经不同浓度黄芩苷处理后,黏附与聚集阶段膜内菌活性均显著降低（P<0.05或0.01）,且以1/2MIC浓度黄芩苷的抑菌作用最强。（3）电镜下可见,经1/2 MIC浓度的黄芩苷处理后,黏附与聚集阶段的分离株未形成或形成少量生物被膜。结果表明1/2MIC浓度的黄芩苷对猪源Ex PEC分离株的生物被膜形成具有较强的抑制作用。3)黄芩苷对猪源Ex PEC分离株生物被膜的清除效果分析。论文中采用上述方法检查黄芩苷对成熟生物被膜的清除效果。结果显示,（1）与处理前相比,各分离株成熟生物被膜经不同浓度黄芩苷处理后,基质量均显著减少（p<0.05或0.01）,且以2MIC浓度黄芩苷的清除作用最强。（2）与处理前相比,经不同浓度黄芩苷处理后,膜内菌代谢活性受到显著抑制（p<0.05或0.01）,且以2MIC浓度黄芩苷除菌效果最好。（3）电镜下可见,经2MIC浓度的黄芩苷处理后,各分离株的生物被膜几乎全部被清除。结果表明2MIC浓度的黄芩苷对猪源Ex PEC分离株的成熟生物被膜具有较好的清除效果。4)黄芩苷对猪源Ex PEC分离株成膜相关基因表达的影响。论文中采用RT-q PCR方法检测各分离株经黄芩苷处理后,其携带的成膜相关基因的转录表达情况。结果发现,与未处理组相比,各分离株经2MIC黄芩苷处理后,lux S基因和glm U基因均显著下调（p<0.05）,而iha基因经处理后均显著上调（p<0.05）。结果表明2MIC浓度的黄芩苷可通过显著改变生物被膜相关基因的转录表达水平参与抑制或清除生物被膜。综上所述,本课题探明了三株猪源Ex PEC的生物被膜形成特性。明确1/2MIC浓度的黄芩苷对猪源Ex PEC分离株的生物被膜形成具有较强抑制作用,2MIC浓度的黄芩苷对成熟生物被膜具有较好的清除效果。明晰2MIC浓度黄芩苷能显著改变三种成膜相关基因的转录表达水平。本课题的研究结果为从生物被膜形成角度防治猪源Ex PEC感染奠定了良好基础。