大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶催化磷酸吡哆醇和磷酸吡哆胺氧化形成磷酸吡哆醛,该氧化过程以黄素单核苷酸为中间电子受体,氧气为最终电子受体；该反应是大肠杆菌从头合成磷酸毗哆醛的最后一步,也是大肠杆菌和哺乳细胞中通过补救途径合成磷酸吡哆醛的关键一步。乙酰化修饰普遍存在于胞内的关键代谢酶中,近年来的研究结果显示乙酰化修饰在细胞动力学、细胞凋亡、能量代谢、蛋白质运输和自噬等过程中都发挥重要作用。本实验室早期蛋白质芯片筛选结果表明,大肠杆菌磷酸毗哆醇氧化酶可能具有乙酰化修饰位点,通过Western blotting实验,我们首次确认了大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶的乙酰化修饰现象,通过质谱进一步的分析,得到了该酶的两个赖氨酸乙酰化修饰位点,分别是72和159位。对不同来源的磷酸吡哆醇氧化酶氨基酸序列进行多重序列比对后发现,72位赖氨酸高度保守,159位赖氨酸的保守性较低。对这两个乙酰化修饰位点分别进行了定点突变,结果表明72位赖氨酸对于大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶保持酶活力具有关键性作用。在我们构建的72位的四个突变体(K72R, K72Q, K72P和K72A)中,除了K72R之外,其余三个突变体都只保留了小于10%的酶活力,酶学常数也发生了改变；而且该位点的突变还影响了该酶反应的最适pH值,最适温度和热稳定性等基本性质；159位氨基酸定点突变后对该酶活力的影响较小。