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新孢子虫病是一种新发现的，由新孢子虫引起的胞内寄生性原虫病，主要引起孕畜流产或产死胎，以及新幼畜的运动障碍和神经系统疾病，该病呈世界性分布，危害严重，给养殖业带来极大的经济损失，但目前尚无有效的预防新孢子虫病的疫苗。本研究在构建新孢子虫速殖子T7噬菌体展示文库基础上，利用Vero细胞对文库进行筛选后获得了宿主细胞结合蛋白，并利用筛选后的蛋白制备了新孢子虫重组蛋白苗和核酸疫苗，并确定了单独免疫和联合免疫的保护效果，为新孢子虫病的预防奠定了基础。利用T7select10-3b载体构建了新孢子虫速殖子T7噬菌体展示文库，扩增后文库滴度为5.24×1012pfu/mL，库容量为8.38×1012个重组子，文库重组率为100%。利用Vero细胞对构建的展示文库进行筛选，经过5轮亲和筛选后获得了9个阳性克隆，经测序后Blast分析，包括一个致密颗粒GRA7基因、5个核糖体基因和3个假定蛋白基因。本研究选取了其中一个假定蛋白和GRA7蛋白作为疫苗候选，以研究它们的保护效果。选择的假定蛋白氨基酸序列与弓形虫酰基甘油脂酶同源性为80%，暂根据其编码的蛋白大小命名为NcP78。利用原核表达载体pGEX-4T-1和pET-28a分别表达NcP78和GRA7重组蛋白，经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定该蛋白均得到了表达。利用真核表达载体pVAX1分别制备了NcP78和GRA7基因的核酸疫苗，经Western-Blot和IFA鉴定该蛋白均得到了表达。用新孢子虫NcP78、GRA7重组蛋白和核酸疫苗分别免疫及核酸/蛋白联合免疫母鼠后，测定IgG、IgG1、IgG2a、IL-4和IFN-γ表达水平。结果表明免疫小鼠IgG抗体水平升高，且IgG2a抗体和IFN-γ表达水平升高，表明重组蛋白可激发机体产生Th1型免疫反应，IgG1抗体和IL-4表达水平升高，表明可激发机体产生Th2型免疫反应，综上结果表明，NcP78疫苗和GRA7疫苗可激发小鼠机体产生Th1/Th2型免疫反应。免疫血清体外侵入抑制试验表明，NcP78重组蛋白免疫血清和GRA7重组蛋白免疫血清体外抑制率分别为40%和55%；NcP78核酸疫苗免疫血清和GRA7核酸疫苗免疫血清体外抑制率分别为40%和50%；NcP78核酸/蛋白联合免疫血清和GRA7核酸/蛋白联合免疫血清体外抑制率分别为45%和70%，表明免疫血清可抑制新孢子虫对宿主细胞的侵入，并且NcP78和GRA7为新孢子虫宿主细胞结合蛋白。免疫母鼠怀孕10天后感染新孢子虫，通过母鼠和后代仔鼠的存活率、脑组织中虫体数量等评价重组疫苗对新孢子虫保护效果。（1）新孢子虫NcP78、GRA7重组蛋白免疫保护效果研究结果表明，NcP78和GRA7重组蛋白免疫后可显著提高小鼠的存活率（NcP78组、GRA7组和空白感染组的存活率在母鼠中分别为60%，70%和40%，在仔鼠中分别为68.4%，73.7%和42%）。荧光定量Realtime-PCR表明，2个重组蛋白均可减轻脑部新孢子虫的感染（计数每20ng脑组织中新孢子虫的数量，NcP78疫苗组、GRA7疫苗组和空白感染组在母鼠中分别为356.66±14.94，259.59±19.02和521.6±7.1，而在仔鼠中分别为64.53±4.47，48.83±2.76和106.78±7.67）。此外，两个重组蛋白免疫可改善小鼠体重减轻、产仔数减少和流产等新孢子虫病症状。以上结果表明，GRA7和NcP78重组蛋白对新孢子虫具有一定保护效果，且GRA7重组蛋白的保护效果好于NcP78重组蛋白。（2）新孢子虫核酸疫苗免疫保护效果研究结果表明：NcP78和GRA7核酸疫苗可显著提高小鼠的存活率（NcP78组、GRA7组和空白感染组在母鼠中的存活率分别为60%、60%和40%，在仔鼠中分别为：53.8%，58.3%和42%）。荧光定量试验表明，两种核酸疫苗可减轻脑部新孢子虫的感染（计数每20ng脑组织中新孢子虫的数量，NcP78组、NcP78组和空白感染组在母鼠脑组织中数量分别为378.8±27.95，287.17±32.51和521.6±7.1，在仔鼠中其数量分别为58.37±5.77，45.39±6.73和106.78±7.67）。表明NcP78和GRA7核酸疫苗对新孢子虫感染具有一定保护效果，GRA7重组核酸疫苗的保护效果好于NcP78重组核酸疫苗。（3）核酸/蛋白联合免疫保护效果研究结果表明：NcP78的核酸/蛋白联合免疫和GRA7的核酸/蛋白联合可显著提高小鼠的存活率（NcP78联合免疫组、GRA7联合免疫组和空白感染组在母鼠中的存活率分别为60%，70%和40%；而在仔鼠中分别为61.1%，66.7%和42%）。两种联合免疫可减轻脑部新孢子虫的感染（计数每20ng脑组织中新孢子虫的数量，NcP78联合免疫组、GRA7联合免疫组和空白感染组在母鼠脑组织中分别为：338.8.45±10.09，308.99±53.47和521.6±7.1；在仔鼠中分别为69.39±4.82，52.27±3.74和106.78±7.67）。表明NcP78的核酸/蛋白联合免疫和GRA7的核酸/蛋白联合对新孢子虫具有一定保护效果，且GRA7的联合免疫保护效果好于NcP78联合免疫保护效果。但这两种联合免疫所取得的保护效果与单独的蛋白疫苗或核酸疫苗相比，并没有显著加强。