糖尿病肾病相关microRNA表达谱及let-7a基因启动子调控区域多态性的研究

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目的用生物信息学方法,富集和筛选Ⅱ型糖尿病(DM)中相关的微小RNAs(microRNAs,miRNAs);应用MicroRNA微阵列芯片检测技术建立糖尿病肾病(DN)循环miRNA表达谱,并与DM中miRNA表达谱相比较,找出在DM及DN中均异常表达的miRNAs。方法从GEO数据库中下载5套基因芯片数据集,应用TIGRMultiExperiment Viewer (MEV:version4.9)软件对其原始数据进行重新整合,SAM软件统计出DM相关芯片数据集中表达差异的miRNAs;应用μ Paraflo microRNA微阵列技术检测DM及DN患者血液差异表达的miRNAs;选择在DM及DN相关miRNA表达谱中均表达异常的let-7a,进行定量RT-PCR验证。结果生物信息学方法共富集了18个在4套及以上芯片数据集中均有表达差异的DM相关miRNAs。MicroRNA微阵列芯片检测到49个miRNAs在DN中差异表达。其中,let-7a在DM中上调,但在DN中为显著下调的miRNA,通过定量RT-PCR检测let-7a的表达水平,结果与芯片表达谱中趋势致。结论DM及DN相关miRNA表达谱的建立可能为寻找诊断和治疗DN中特异敏感的新型潜在生物学标记提供思路。在DM及DN中均表达异常的miRNAlet-7a,可能参与调控糖尿病肾病的发生发展。目的通过对let-7a基因启动子调控区域多态位点的进行基因分型,评估let-7a调控区域单核甘酸多态性(SNP)对糖尿病肾病的易感性。方法生物信息学方法预测并筛选三个位于let-7a前体(let-7a-2)启动子调控区域标签SNP(tag SNP),采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RFLP-PCR)法对108例糖尿病肾病(DN)、104例Ⅱ型糖尿病(DM)患者及62例健康人对照(CON)三个SNP进行基因分型并测序验证。结果let-7a基因调控区域rs1143770多态位点的CT杂合子基因型在DN、DM、CON三组间有显著差异(P<0.05),且在DM组和DN组CT+TT两基因型均依次较CON组显著升高(P=0.049;P=0.001)。结论miRNA let-7a启动子调控区rs1143770多态与中国汉族人群糖尿病肾病相关,可能是个潜在的功能位点。
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