固载化蛋白质是分离对映体固定相中用途最广的几种之一,以其广泛的选择性受到色谱工作者的青睐。本文致力于摸索出牛血清蛋白手性柱的合成工艺,并在该色谱柱上拆分了色氨酸、L苯、匹多莫德、亚叶酸钙、甲氨蝶呤这5中不同特性的手性对映体。　　 首先,用羰基咪唑(CDI)法在12 h内合成了BSA生物手性柱,比较了硅胶氨化的程度、溶解CDI的溶剂等因素对成品柱的影响,发现硅胶/氨化试剂按照5g/1 mL的配比,用乙腈溶解CDI所得到的色谱柱的手性拆分性能最好,在磷酸缓冲盐作为流动相的条件下,对L苯的分离度Rs=3.91,对色氨酸的分离度Rs=5.03。　　 其次,用自制的BSA生物手性柱成功拆分了生物活性物质色氨酸和弱碱性物质L苯。并在pH值5.0-7.0,离子强度5—50 mmol/L,的范围内,考查了pH值和离子强度对两者手性拆分性能的影响。随着pH从5.0上升到7.0的过程中,对于生物活性样品色氨酸,L-广色氨酸的保留值随着pH值的增加大幅增加,而D-色氨酸的保留值随pH变化基本不变；分离度由1.15上升到8.91,增加了6.8倍；弱碱性样品L苯的分离度随着pH值的增加有小幅度的增加。随着离子强度的增加,两者的保留值都有不同程度的下降,从而分离度下降。　　 最后,我们结合实际需要,首次成功拆分了合作企业提供的酸性手性药物匹多莫德和酸碱两性药物甲氨蝶呤,考查了流动相的pH值和离子强度对拆分的影响,优化了色谱条件。优化结果为:对于匹多莫德,pH5.0,5 mmol/L的磷酸缓冲溶液作为流动相,0.5 ml/min的流速,RS和SR对映体的分离度达到1.91；对于甲氨蝶呤,色谱条件为磷酸盐缓冲液(pH6.5,50 mmol/L):正丙醇=92:8流动相,流速0.8 mL/min,两对映体的分离度可达到7.80,并检测出该供试样品中两对映体的含量比为89:11。