目的：制备人宫颈癌癌基因(Human Cervical Cancer Oncogene，简称HCCR)蛋白多克隆抗体和单克隆抗体，为研制ELISA试剂盒提供基础。方法：用PCR克隆法构建pMBP-c-HCCR融合蛋白，在大肠杆菌中诱导表达、镍柱纯化，纯化后的融合蛋白经质谱鉴定确认含人HCCR片段，将此免疫Bclb／c小鼠获得抗HCCR蛋白多克隆抗体；取效价高于1：10~5的小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞用PEG法融合制备杂交瘤细胞株，经间接ELISA和Western blot筛选鉴定出能分泌特异性抗体的细胞株。结果：经间接ELISA和Western blot鉴定制备的HCCR蛋白多克隆抗体具有较高的效价和较好的特异性；HCCR在人肝癌细胞株7721中均有表达且定位于细胞的胞膜和胞浆。用单克隆抗体行western blot，与融合蛋白MBP-HCCR-His有特异性反应，而与融合蛋白MBP-His无反应，说明该单抗具有HCCR蛋白特异性。结论：成功制备了高效价的特异性HCCR蛋白多克隆抗体，并初步获得了抗HCCR单克隆抗体。鉴于HCCR的过度表达与肝细胞癌的早期发生有关，它有可能成为肝细胞癌早期诊断和治疗的新靶点。目的检测HCCR蛋白在肿瘤细胞及组织中的表达，并探讨其在肿瘤组织中的表达与肿瘤临床病理特征的关系。方法应用免疫荧光确定HCCR在肿瘤细胞SMMC7721，MKN-28，MKN-45中的亚细胞定位，并通过免疫组织化学及Westerm blot研究7种人肿瘤细胞及291例13种人肿瘤组织中HCCR的表达情况，肿瘤包括肝癌、肠癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、肺癌、肾癌、神经胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌和宫颈癌。结果HCCR定位于肿瘤细胞的胞膜和胞浆，且在大多数肿瘤细胞中有较强表达。HCCR在13种人恶性肿瘤中的阳性表达率为：乳腺癌83.3％，肠癌81.8％，子宫内膜癌80％，肺癌80％，肝癌79.3％，卵巢癌75％，胰腺癌73.5％，宫颈癌72.7％，肾癌71.4％，胃癌69.2％，神经胶质瘤66.7％，食管癌57.1％，甲状腺癌50％，HCCR在大多数人肿瘤组织中的阳性表达率明显高于相应的癌旁组织或正常组织(P＜0.05)。在胃癌组织中非胃窦部的肿瘤HCCR阳性表达率明显高于胃窦部的肿瘤(P＜0.05)。HCCR在Ⅲ级肝癌组织中的阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ级肝癌组织(P＜0.05)。结论HCCR在大多数肿瘤中的过度表达与肿瘤的早期发生有关，且HCCR在肝癌组织中的过度表达与其组织分级之间的相关性提示HCCR与肿瘤的发展有关，它有可能成为肝细胞癌早期诊断和治疗的新靶点。目的：探讨骨桥蛋白(osteopontin，OPN)在人肝癌等恶性肿瘤中的表达，并分析其与肿瘤临床病理特征之间的关系。方法：应用免疫组织化学法检测OPN在374例人恶性肿瘤组织(肝癌49例、食管癌93例、胃癌86例、肠癌32例、胰腺癌43例、肺癌28例、肾癌17例、乳腺癌8例、神经胶质瘤18例)及147例癌旁组织中的表达。结果：(1)恶性肿瘤组织中OPN的阳性表达率均较高，其中肝癌、食管癌、胃癌、肠癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、脑胶质瘤表达率分别为71.4％、64.5％、65.1％、78.1％、65.1％、71.4％、82.4％、87.5％和44.4％，其中肝癌、食管癌、胃癌、肠癌、胰腺癌、肺癌和肾癌与其相应的癌旁组织中OPN的表达具有显著性差异(P＜0.05)。(2)肝癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、肺癌和神经胶质瘤中OPN的表达均与肿瘤的淋巴结转移相关(P＜0.05)。结论：OPN在肝癌等大多数肿瘤呈过度表达，且与恶性肿瘤的侵袭、转移有关，提示OPN可作为恶性肿瘤浸润、转移及评估预后的一项重要指标。目的：检测骨桥蛋白(osteopontin，OPN)在肝癌病人外周血的表达水平，分析其与肝癌临床病理特征之间的关系，探讨骨桥蛋白作为肝癌肿瘤标志物的价值。方法：应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测51例肝癌患者的外周血(OPN)，结合临床病理特征进行分析。结果：肝癌患者血浆OPN水平显著高于正常对照组，其表达水平与肿瘤的淋巴结转移、血管浸润和肝包膜浸润等病理特征有明显相关(P＜0.05)，检测的敏感性为90.2％，特异性为90.6％。结论：血浆OPN是诊断肝癌的一种可能的标志物，其临床应用尚待进一步研究。目的：转移相关基因骨桥蛋白在肝癌中的表达方式、途径尚不清楚，本研究检测生长因子受体激活后骨桥蛋白在肝癌细胞株HepG2中的表达变化规律，并探讨这一变化的信号传导途径。并检测骨桥蛋白在HepG2细胞转染蛋白激酶B(Akt)前后的表达，进一步探讨磷脂酰肌醇3激酶信号途径中的关键基因-Akt与骨桥蛋白表达的关系。方法：利用蛋白印迹技术检测HepG2在表皮生长因子(EGF)刺激前后骨桥蛋白的表达；并用Wortmannin特异性地阻断磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通道，以观察骨桥蛋白表达的变化是否与PI3K信号传导途径有关。用脂质体介导的基因转染法将含有Akt基因的质粒转染HepG2细胞，并用western blot鉴定；骨桥蛋白的表达用Northern blot和western blot方法检测。结果：在无血清培养条件下，骨桥蛋白在HepG2中少量表达，而EGF能诱导其表达，且呈剂量依赖性及时间依赖性。先用Wortmannin预处理HepG2细胞再用EGF诱导，能阻断骨桥蛋白的表达。Akt基因成功转染HepG2细胞，经western blot能检测到HepG2细胞中外源表达的Akt基因；Northern blot和Western blot检测发现，Akt在核酸和蛋白水平调节骨桥蛋白的表达：在无血清培养条件下，骨桥蛋白在HepG2中结构性表达量很少或无表达，转染活性型Akt后骨桥蛋白表达升高。在有血清培养条件下，HepG2细胞转染缺陷型Akt基因后骨桥蛋白表达下降。结论：EGF通过PI3K信号通道诱导转移相关基因—骨桥蛋白的表达，蛋白激酶B(Akt)调节转移相关基因—骨桥蛋白在肝癌细胞中的表达，提示可通过干预该途径中的某些关键基因(如Akt基因)失活来阻断骨桥蛋白的产生，从而抑制肝癌的转移。目的观察骨桥蛋白(OPN)RNA干扰(siRNA)在肝癌HepG2细胞中的沉默效应，并探讨以OPN为靶标的肝癌基因治疗的可能性。方法设计合成骨桥蛋白RNA干扰寡核苷酸片段，将之克隆至pGCsi真核表达载体上，并经测序分析鉴定。用脂质体法将质粒转染HepG2细胞，筛选，并经Western blot鉴定。将稳定转染OPNsiRNA的细胞行MTT、软琼脂分析(soft agar)和划痕实验(wound closure assay)以观察细胞生物学行为的变化。结果成功构建3个pGCsi-OPN质粒，瞬时转染293T细胞后发现pGCsi-OPN2有干扰效应；进一步稳定转染肝癌HepG2细胞，筛选到4株阳性细胞克隆。稳定转染OPN siRNA的HepG2细胞，其增殖能力、软琼脂克隆形成能力及迁移能力均下降。结论筛选到稳定转染OPN-siRNA的肝癌HepG2细胞，OPN基因沉默能抑制肝癌细胞的迁移，OPN有可能成为肝癌基因治疗的靶标。