目的：近年来乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，约占所有女性恶性肿瘤发病率的30%。发病早、发现晚为乳腺癌的主要特征，与子宫内膜癌并列女性肿瘤发病率的前两位。人体中的乳房腺上皮细胞和导管上皮细胞好发恶性突变形成乳腺癌细胞，它在多因素刺激下发生基因突变，导致细胞增殖失控，细胞形态、功能发生变异。癌细胞挤压、侵袭、破坏正常乳腺组织及其结构，肿瘤细胞变形、穿透血管壁的基底膜进入血管和淋巴管系统后被运送至全身各个部位，肿瘤细胞在新的粘附位置增殖后形成新的血管和淋巴网络为新发的瘤体提供发展基质。本研究中作者通过人工合成并体外转染miR let-7b于乳腺癌MCF-7细胞，观察其对MCF-7细胞的迁移能力的影响，另一方面比较转染前后乳腺癌MCF-7细胞内IL-6表达水平的变化从而推测miR let-7b与IL-6之间关系，最后通过分子生物学方法验证miR let-7b是否与IL-6结合，探讨miR let-7b是否抑制乳腺癌细胞迁移及其可能与IL-6相关的作用机制，在评估乳腺癌患者的转移及临床早期预防和治疗方面乳腺癌细胞的转移提供理论依据。方法：1.体外培养人乳腺癌MCF-7细胞，将实验组分为四组：空白对照组、miR let-7b转染组、miR-control转染组、anti-miR let-7b转染组并分别转染对应的人工合成miRNA，应用划痕实验方法，在显微镜下观察转染后24h不同实验组划痕距离的改变而判断细胞迁移能力的变化。2. miR let-7b转染组、miR-control转染组、anti-miR let-7b转染组分别转染对应的人工合成miRNA培养48h后，粉碎细胞、提取RNA并反转录cDNA及提取蛋白，运用PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞内IL-6的表达水平。3.通过capitalbio数据库和生物信息学软件TargetScan、DIANA-micoT3.0这两个软件两两比对，用载体构建、双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合。4.统计学分析：所有数据资料以均数±标准差(x±S)表示。采用SPSS17.0统计软件统计处理，用方差分析方法进行各实验组结果数据对比，采用LSD-t检验方法进行两两比较，认为当P <0.05时数据差异有统计学意义。结果：1.划痕实验：将转染miR-control、miR let-7b、anti-miR let-7b以及未转染的MCF-7细胞分别接种于6孔板中，分为空白对照组、miR-control转染组、miR let-7b转染组、anti-miR let-7b转染组，待细胞贴壁长满进行划痕实验，在细胞生长0h、24h后分别进行拍照，结果显示转染miR let-7b的细胞的划痕距离与空白对照组细胞的划痕距离相比明显增大，而转染anti-miR let-7b的细胞其划痕距离远小于空白对照组划痕距离。miR let-7b组与anti-miR let-7b组划痕距离差距更为明显，本实验方法表明miR let-7b能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力，而anti-miR let-7b能够明显促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移。2. PCR实验：将转染miR-control、miR let-7b、anti-miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞培养48h后粉碎并提取总RNA、反转cDNA，以其为模板进行PCR，PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测并照相，并分析灰度值。miR-control、miR let-7b组和anti-miR let-7b组的PCR灰度值（IL-6/GADPH）为0.89±0.24，0.23±0.18，1.03±0.21，经比对各组PCR条带灰度值总体比较时差异有统计学意义（F=5.77，P <0.01）。经miR let-7b转染后的人乳腺癌MCF-7细胞，IL-6的表达强度与其余对照组相比明显降低（t=5.32），而经anti-miR let-7b转染的细胞株内IL-6表达水平显著增高（t=4.00），其差别均有统计学意义(P <0.05)。miR let-7b组与anti-miRlet-7b组灰度值差异更为显著。实验结果说明miR let-7b明显抑制IL-6的表达水平，而anti-miR let-7b能够提高IL-6的表达水平。3.蛋白质印迹法(Western blot)：将转染miR let-7b、miR-control、anti-miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞培养48h后粉碎并提取总蛋白，实验后行灰度值分析，蛋白质条带印迹灰度值（IL-6/β-肌动蛋白）分别为miR-control组0.76±0.28，miR let-7b组0.59±0.16，anti-miR let-7b组为1.22±0.23，各实验组对比时发现各实验分组总体比较时有差异（F=6.01，P <0.01）。实验组miR let-7b与空白对照组相比，经miR let-7b转染的MCF-7细胞株中IL-6的表达水平相对降低（t=5.543，P=0.037）。而在另一实验组，anti-miR let-7b转染组内IL-6的表达水平相对增高（t=5.713，p=0.008），其差别均有统计学意义(P <0.05)。miR let-7b组与anti-miR let-7b组灰度值差异更为显著。实验结果说明miR let-7b明显抑制IL-6的表达水平，而anti-miR let-7b提高IL-6的表达水平。4.生物信息学软件及报告基因分析：利用capitalbio数据库查询，生物信息学软件TargetScan、DIANA-micoT3.0证实IL-6与miR let-7b结合。我们构建了IL-63’UTR、IL-63’UTR突变体这两种的报告基因载体。我们将miR let-7b和两种载体共转染人乳腺癌MCF-7细胞。在转染这两种混合物48小时后，室温下裂解细胞、12000rpm离心、分离并吸取上清液加入测定缓冲液并放入双荧光光度计中，再向其加入荧光淬灭剂，淬灭萤火虫荧光素酶的反应，同时启动海肾荧光素酶，测定20s内的光输出。两组荧光数值的比值（第一组/第二组）为相对活性。各组实验均重复三次并保持独立性，最后进行t检验。结果我们发现：共同转染miR let-7b和pGL3-Control-IL-63’UTR载体后其荧光素酶活性明显下降。共同转染miR let-7b和mut-pGL3-Control-IL-63’UTR的对照组，其报告基因活性无明显变化，结果显示与对照组相比，miR let-7b显著抑制PGL-3-IL-6的荧光酶素活性。这两组对照结果表明miR let-7b可以靶向IL-6的3’UTR表明两者结合。结论：1. miR let-7b可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的迁移而anti-miR let-7b可促进MCF-7细胞的迁移。2.乳腺癌MCF-7细胞转染miR let-7b后其细胞内的IL-6表达水平较对照组降低而MCF-7细胞转染anti-miR let-7b其细胞内的IL-6表达水平较对照组增高。3. IL-6可与miR let-7b结合的实验结果进一步证实了miR let-7b可通过抑制IL-6的表达从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移。