论文部分内容阅读
目的探讨牛磺熊去氧胆酸对改良Allen’s重物打击法构建大鼠急性脊髓损伤模型神经细胞自噬的影响。方法选取6-8周雄性SD大鼠,体重250-300g共计72只。随机分为三组:假手术组、手术组对照组(生理盐水组)、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)组(分高低剂量两个亚组)。分别于脊髓损伤后24小时、5天、10天处死实验动物。参照Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分,对各组大鼠损伤后和猝死前作后肢运动功能评分,比较对照组与TUDCA组大鼠在运动功能方面的差异性;采用电子显微镜,观察神经细胞中自噬现象的发生发展及TUDCA干预后受损脊髓神经细胞的生物学特性;HE染色对比脊髓组织形态在光镜下的差异;采用Western blotting方法,检测自噬相关因子(Beclin-1)在各组的表达情况;检测凋亡相关因子caspass-3在各组的表达情况;并采用RT-PCR方法分别检测上述蛋白的mRNA表达。结果BBB运动功能评分中假手术组大鼠的活动不受限。对照组与实验组比较,对照组的BBB评分值明显低于实验组,反映到大鼠的活动上则可见活动性略差于实验组。实验组中高低药物剂量对大鼠活动的影响无明显差异,即生理盐水组的运动功能评分明显减弱。采用电子显微镜,观察神经细胞中自噬现象的发生发展及TUDCA干预后受损脊髓神经细胞的生物学特性;HE染色对比脊髓组织形态在光镜下的差异。正常脊髓形态组织,脊髓神经元及胶质细胞完整,未见明显坏死细胞。对照组损伤处的脊髓组织,可以见到细胞呈空泡状变性,其间大片的出血、水肿,细胞组织结构疏松明显,灰质组织被破坏,伴有大量神经元细胞坏死,而存活的神经元细胞中,部分可见核固缩损伤处的脊髓组织。TUDCA处理的实验组组,与对照组相比标本上同样以出血、水肿和坏死为主要表现,但对照组最大的特点表现在,损伤中心附近的节段,同样出现损伤,可以看到损伤范围扩大,与其相邻的神经细胞破坏明显,部分细胞形态有了较明显的改变,实验组中,虽然细胞损伤的范围较之前同样有所扩大,但是和对照组相比,波及的范围明显较小,并且相邻神经细胞的破坏程度较轻。采用Western blotting方法,检测自噬相关因子(Beclin-1)在各组的表达情况。实验组Beclin-1的表达均高于对照组,并且有统计学差异,同样TUDCA的给药剂量的高低之间比较无明显统计学差异。采用Western blotting方法,检测凋亡相关因子(caspass-3)在各组的表达情况。SCI早期对照组大鼠各时间点caspase-3的表达均较假手术组明显增高,而实验组在给予TUDCA干预后caspase-3的表达均低于对照组,并且有统计学差异。而实验组中TUDCA给药高低剂量的比较中无明显统计学差异。结论TUDCA的干预可显著激活大鼠急性脊髓损伤神经细胞自噬的表达,抑制神经细胞的凋亡对神经元细胞有保护作用。