广西猪瘟病毒分子流行病学调查及单克隆抗体的制备

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本研究采集CSFV疑似样品并利用巢氏RT-PCR方法进行检测,从检测CSFV核酸阳性样品中挑选有代表性的进行E2基因克隆。将获得的序列与在genebank登录的其它广西CSFV E2基因序列进行综合分析,全面了解广西CSFV流行及遗传变异情况。从结果中发现广西流行毒株与HCLV疫苗株氨基酸与核苷酸同源性均随着时间推移发生变化,核苷酸、氨基酸最高均下降了3.7%。通过构建进化树发现,广西流行毒株属于2个基因群,4个基因亚型,即1.1和2.1、2.2、2.3亚群,基因2.1亚型毒株已成为流行的优势毒株,未见基因1.2亚型及基因3群毒株。再通过统计数据发现保育猪发病仍然占第一位,但哺乳仔猪发病率呈上升的趋势,由过去的18.42%提高到32.39%。以SHIMEN株为代表的1.1亚型毒株仍然存在广西猪群中,主要引起母猪繁殖障碍和隐性感染,新生仔猪发病为主,基因2.1型毒株主要引起保育猪发病。本研究通过CSFV分子流行病学调查,掌握广西近年来猪瘟病毒的流行情况,为制定广西猪瘟的防控措施提供依据。此外,将本实验室保存的猪瘟病毒经纯化后免疫BALB/c小鼠,通过单克隆抗体技术制备了两株长期稳定分泌抗猪瘟病毒的单抗,分别命名为CSFV7和CSFV14.对单抗进行鉴定后发现,CSFV7和CSFV14杂交瘤培养上清效价为1:256,腹水上清效价达1:106;抗体亚类为IgG2b;相对亲和指数分别为1.5mol/L、1mol/L,表明具有较好的茉和力;早抗Western-blot与IFA反应证实两株单抗不仅特异性与CSFV反应,而且是针对猪瘟病毒E2重组蛋白的单克隆抗体。制备灵敏度高、特异性强的抗猪瘟病毒单克隆抗体,为进一步建立快速检测猪瘟病毒抗原方法打下基础。
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