调节氧化应激抑制炎症的水凝胶电纺丝纤维人工骨膜的制备和研究

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目的:将具有天然抗炎作用的单宁酸(Tannic acid,TA)与紫外射线交联的甲基丙烯酸酐明胶水凝胶(Gelatinmethacrylate,GelMA)电纺丝纤维通过氢键结合,制备成具有调节氧化应激、抑制炎症功能的人工骨膜,并研究了其在大鼠颅骨临界缺损模型中促进骨再生的能力。方法:通过静电电纺丝技术制备GelMA水凝胶电纺丝纤维,再使用紫外光交联技术使纤维自交联,形成稳定的纤维膜结构,最后使用物理浸泡法使TA和GelMA纤维通过氢键结合,形成功能化的人工骨膜结构。在扫描电镜下观察人工骨膜的纤维组成结构,并使用红外光谱、力学仪器等对GelMA纤维和GelMA-TA纤维分别表征。将人工骨膜分为Control组,GelMA组和GelMA-TA组,与大鼠骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)在培养箱中共同培养,然后应用Cell Counting Kit-8(CCK8)法、活死荧光染色法研究测定人工骨膜的生物相容性;应用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色法、茜素红染色法、骨钙蛋白(Osteocalcin,OCN)免疫荧光染色法,评价人工骨膜对BMSCs的成骨分化能力的影响;应用聚合酶链式反应技术(Polymerase Chain Reaction,PCR)和免疫荧光染色技术半定量分析评价人工骨膜的抗炎抗氧化能力;最后使用大鼠颅骨缺损模型行动物实验,并使用微型CT(Micro-CT)、苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法、马松(MASSON)染色和免疫组化染色多方面评价功能化人工骨膜在动物体内的抗炎能力和对成骨分化的影响。结果:GelMA-TA人工骨膜比单纯GeIMA纤维膜表现出更优异的力学性能和生物相容性;在体外细胞实验中GelMA-TA人工骨膜对BMSCs表现出优秀的抗炎能力和抗氧化能力,以及更强的促成骨分化能力;在大鼠颅骨临界缺损模型中,GelMA-TA组的骨体积分数(Bone Volumeover Total Volume,BV/TV)和骨矿物密度(Bone Mineral Density,BMD)都高于另外两组,显示出最好的骨再生能力,并且在免疫组化染色中表现出对慢性炎症的抑制作用。结论:GelMA-TA功能化人工骨膜拥有更优异的力学性能和稳定性,有良好的生物相容性。在细胞实验中表现出明显的抗炎能力和活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)清除能力,促进BMSCs分化为成骨细胞,形成稳定钙结节。在动物实验中对颅骨缺损分化成骨修复有促进作用,新生骨活动更加活跃,且慢性炎症得到抑制。
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