【摘 要】
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近些年的研究表明,文冠果果壳乙醇提取物有提高记忆的功效,文冠果皂苷是其有效成分。兴奋性氨基酸尤其是谷氨酸(Glu)的兴奋性神经毒性作用越来越受到重视。谷氨酸不仅可以通
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近些年的研究表明,文冠果果壳乙醇提取物有提高记忆的功效,文冠果皂苷是其有效成分。兴奋性氨基酸尤其是谷氨酸(Glu)的兴奋性神经毒性作用越来越受到重视。谷氨酸不仅可以通过激活其离子型受体产生兴奋性毒性以外,还能通过抑制细胞膜上面的谷氨酸和胱氨酸逆转运子的功能而产生细胞毒性,其表现特征为细胞内部的谷胱甘肽的含量降低和活性氧的含量升高,与很多神经系统的疾病有很密切的关系。本实验利用离体培养的神经细胞(SH-SY5Y)建立谷氨酸兴奋性损伤模型,研究文冠果果壳总皂苷对谷氨酸损伤的神经细胞的保护作用及其可能的机制,为其治疗心脑血管疾病提供研究资料。具体实验内容及方法如下:方法:采用体外培养SH-SY5Y细胞,并建立谷氨酸损伤SH-SY5Y细胞模型,每组用5mmol· L-1谷氨酸预处理30min后,加入不同浓度的文冠果总皂苷(10,25,50, lOOμg·ml-1),共同培养24h,利用MTT法检测细胞存活率,检测细胞内ROS活性,检测细胞内NO和MDA含量,采用实时荧光PCR(QPCR)检测细胞Bax、Bcl-2、caspase-3以及caspase-8基因的表达。结果显示5mmol·L-1谷氨酸作用SH-SY5Y细胞30min后对细胞有明显的损伤作用,存活率只有(62.86±0.096)%。在浓度为10、25、50和100·ml-1的文冠果果壳总皂苷能有效的减少谷氨酸对细胞的损伤,提高细胞的存活率,在浓度为10到100Pg·ml-1之间呈一定的量效关系;将细胞破碎并收集上清液,检测其中的MDA的含量以及NO含量,均有明显下降;细胞内活性样含量减少。在文冠果果壳总皂苷的作用下,能够明显下调受损伤的细胞中的Caspase-3、 Caspase-8以及Bax基因的表达量,并使其趋于正常细胞表达与模型组比较,各个浓度的文冠果果壳总皂苷均能明显的下调Caspase-3、aspase-8以及Bax基因的表达量,明显的量上调bcl-2基因的表达量。
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