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本课题以钙结合的葵花籽、花生蛋白酶解肽为研究对象,采用超滤、钙离子螯合亲和层析、反向高效液相色谱及液质联用技术对其进行分离纯化及结构表征;进一步采用Caco-2细胞模型研究了钙结合的葵花籽、花生蛋白酶解肽促进肠道细胞钙转运的效果。主要研究结果如下:1、采用超滤技术对钙结合的葵花籽、花生蛋白酶解肽进行分离,得到两个高钙结合量的组分,分别是分子量为13kDa的葵花籽蛋白酶解肽K4组分和分子量为≥10kDa的花生蛋白酶解肽H1组分,钙结合量分别为172.50mg/g和220.74mg/g。采用钙离子螯合亲和层析对K4组分和H1组分进一步分离纯化,分别分离出钙结合量较高的KF2组分和HF2组分,钙结合量分别为332.19mg/g和354.54mg/g。进一步采用液质联用技术对高钙结合量的葵花籽蛋白酶解肽KF2组分和花生蛋白酶解肽HF2组分的一级结构进行鉴定。从葵花籽蛋白酶解肽KF2组分中鉴定出7种钙结合肽,其氨基酸序列如下:（1）FVTPEEEQQQMHQR;（2）LAGGISSEHIQGQQQFQGQQGR;（3）LDTQNHENOLDENQRR;（4）FLAGNPQAQAQSQQQQQR;（5）GGIGIGGYGTTGHHGL;（6）NDRNQEVVAIIVDDVNNPANQLDFQAK;（7）QYGGQQTQTVER。其特点含有“EEEQQQ、E-Q-QQQ-QQ、Q-Q-QQQQQ、DD、NN、RR、HH”相连的特征序列。从花生蛋白酶解肽HF2组分中鉴定出8种钙结合肽,其鉴定到的氨基酸序列如下:（1）LLGFGINAENNHR;（2）VIQQGQATVTVANGNNR;（3）NESEEEGAIVTVRGGLR;（4）IVQNLRGENESEEQGAIVTVK;（5）TNNNDNQLDQFPRR;（6）LEENAGGEQEERGQRRR;（7）FQGQDQSQQQQDSHQKVHR;（8）FEGEDQSQQQQQDSHQKVR。其特点含有:“NNHR、QQ-Q、NNR、E-EEE、E-E-EEQ、NNNDN、Q-QDQ-QQQ、EE-EQ-EE-Q、Q-Q-QQQQ、Q-QQQQQ-Q、RR、RRR”等相连的特征序列。从上述钙结合肽中选择与蛋白库匹配度高的葵花籽蛋白酶解肽FVTPEEEQQQMHQR和花生蛋白酶解肽IVQNLRGENESEEQGAIVTVK通过化学固相法进行合成,并测定两条肽链的钙结合量。葵花籽蛋白酶解肽FVTPEEEQQQMHQR的钙结合量为220.11mg/g,花生蛋白酶解肽IVQNLRGENESEEQGAIVTVK的钙结合量为179.70mg/g,表明合成的肽段具有较高的钙结合量。2、采用Caco-2细胞模型,以CaCl2和CPP-Ca为对照,研究钙结合的葵花籽、花生蛋白酶解肽促进肠道细胞钙转运的效果。结果发现:葵花籽蛋白酶解肽-钙复合物的钙转运量为20.72μg/well;花生蛋白酶解肽-钙复合物的钙转运量为24.63μg/well;其促钙转运量均显著高于CaCl2组,与CPP组无显著差异。表明葵花籽、花生蛋白酶解肽都具有很好的促进肠道细胞钙吸收能力,且与CPP效果相当。