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研究背景:目前,脊髓损伤的生理、病理的变化规律,依然没有清楚的阐述。最近研究表明,巨噬细胞在脊髓损伤后的一系列变化中处于重要的位置,了解好巨噬细胞及其亚型的变化更有利于深入了解脊髓损伤的免疫机制。目的:了解脊髓损伤大鼠损伤局部免疫微环境中巨噬细胞不同亚群的变化规律。方法:1.用纽约大学脊髓撞击仪,SD大鼠制备轻、中、重三种程度撞击损伤的脊髓损伤动物模型。2.依据开放场地实验(Openfieldtest,BBB)评估表对手术前和脊髓损伤后SD大鼠进行行为学评估并评定脊髓损伤效果。3.使用CD68FITC,CD86(B7-2)PE,CD163AlexaFluor647三种抗体,采用流式细胞术检测SCI前后外周血的巨噬细胞亚型。4.用密度梯度离心方法分离新鲜脊髓局部浸润的,其后使用CD68FITC,CD86(B7-2)PE,CD163AlexaFluor647三种抗体,采用流式细胞术检测SCI前后损伤局部的巨噬细胞亚型。5.使用CD68、CCR7、Arginase-1,采用免疫荧光技术来观察巨噬细胞亚型在SCI前后损伤局部的时空变化。结果:1.用纽约大学脊髓撞击仪10g×25mm中等程度撞击SD大鼠的T9脊髓致SD大鼠双下肢肌力活动丧失,造成截瘫,并携带病理观察有显著差异。因此10g×25mm中等程度撞击损伤的脊髓损伤动物模型制备效果明显优于10g×15mm轻等程度撞击和10g×50mm重等程度撞击。2.流式细胞术检测SCI前后不同时间点SD大鼠外周血CD68+CD86+/CD68+,CD68+CD163+/CD68+比例无明显化,无显著性差异(p>0.05);流式细胞术检测SCI前后不同时间点SD大鼠脊髓局部CD68+CD86+/CD68+,CD68+CD163+/CD68+比例,发现损伤前后CD68+CD86+/CD68+,CD68+CD163+/CD68+比例在发现各个时间点两两之间有显著差异(p<0.05),且CD68+CD86+/CD68+在损伤后的第1天和第7天出现高峰值而CD68+CD163+/CD68+则是在损伤后的第5天和第14天出现高峰值。3.采用组织免疫荧光染色技术检测SCI前后不同时间点SD大鼠脊髓局部的CD68、CCR7、Arginase-1阳性细胞数量,发现各个时间点两两之间有显著性差异(p<0.05)。结论:1.通过纽约大学脊髓撞击仪制备SD大鼠的三种程度撞击损伤比较,确定以10g×25mm为撞击系数的中等程度撞击损伤是较理想的脊髓损伤动物模型制备方法。2.SD大鼠脊髓损伤手术后外周血中M1型巨噬细胞比例会在损伤的5d和7d之间发生剧烈的变化,分别出现了最高值和最低值。而M2型巨噬细胞比例则在损伤的3d达到最高并且出现了一群变化规律明显的未分化完全的巨噬细胞;而损伤局部的两型巨噬细胞比例都会在损伤后出现明显的增加并且变化曲线走势相近,但M1型巨噬细胞的高峰比例的时间点是损伤的1d和7d。而M2型巨噬细胞的高峰比例的时间点则是损伤的5d和14d。于外周血一样的,出现了一个以是损伤的3d为比例峰值的未分化完全的巨噬细胞。3.采用组织免疫荧光染色技术分析脊髓损伤后各时间点的SD大鼠脊髓损伤局部横断面,发现损伤后两型巨噬细胞的数量都明显增加,并且都是在损伤的5d数量增加到最高;从比例上,M1和M2型巨噬细胞的高峰比例的时间点都是损伤的3d和5d,但M1型巨噬细胞在损伤的21d又出现了回升而M2型巨噬细胞则是持续降低的。