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目的:在氧糖剥夺(OGD)条件下,研究不同浓度异丙酚对原代培养新生SD大鼠海马神经元中HO-1 mRNA时程变化的影响,为探索异丙酚的神经保护机制提供前期的理论依据。方法:1.处理方法:将原代培养海马神经细胞8天,随机分为不同的实验组:C组(单纯OGD)、D组(OGD+DMSO)、P10组(OGD+10μM异丙酚)、P50组(OGD+50μM异丙酚)、P100组(OGD+100μM异丙酚),然后OGD60分钟。在OGD后1h、6h、12h、24h、48h、72h和168h时,收集细胞并提取总RNA。2.HO-1mRNA水平检测方法:RT-PCR后,比较目的基因和β-actin电泳条带的光密度值以进行半定量。3.其他的检测方法:苔盼蓝染色鉴定细胞存活率;免疫组化检测神经元纯度。结果:1.确定海马神经元培养方案及海马神经元鉴定:0.25%胰蛋白酶消化海马组织8分钟;用含血清培养液培养6小时后,换为无血清培养基继续培养,48小时加入5μmol/L的阿糖胞苷作用24小时,继续培养,每3天半量换液;NSE免疫组化检测神经元纯度90%以上。2.单因素方差分析结果显示,OGD30分、45分与OGD60分钟各组间差异有统计学意义(P＜0.05),OGD时间越长,细胞存活率越低。3.优化后的PCR体系及条件分别为:模板量2μl、10×反应缓冲液(含MgCl21.5mmol/L)2.5μl、dNTP(10mM)0.5μl、Taq酶0.5μl、上下游引物各0.5μl,总量为25μl;94℃预变性5分钟,94℃30秒、52℃30秒、72℃40秒,共26个循环,72℃延伸5分钟。4.经SPSS13.0两因素方差分析结果显示:a.在OGD后不同时间点上,海马神经元中HO-1 mRNA水平的变化存在着明显的时间趋势(P＜0.05);b.有或无以及10μM到100μM的异丙酚对OGD后海马神经元中HO-1 mRNA水平的变化的影响无显著性差异(P＞0.05)。结论:异丙酚未能改变OGD后海马神经元中HO-1 mRNA水平:为能确切弄清异丙酚对HO-1表达情况的影响,还需对蛋白水平展开深入的研究。