骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤模型后凋亡因子Fas、Fas-L表达变化

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuhuajian21004
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[目的]:通过静脉移植绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞治疗大鼠脊髓挫伤模型,观察骨髓间充质干细胞存活迁移情况及凋亡因子Fas和Fas1在移植后不同时点的变化情况,为骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤及机理提供实验室依据。 [方法]1、实验动物分组:成年健康SD雌鼠66只(体重200-250g)随机平均分成11组,每组6只,即空白对照组、损伤对照组(术后1天组、3天组、7天组、14天组和21天组)、绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓挫伤模型组即细胞移植治疗组(术后1天组、3天组、7天组、14天组和21天组)。2、脊髓挫伤模型制备:用自制改良Allen装置撞击脊髓T12节段,建立脊髓挫伤模型。3、骨髓间充质干细胞的准备和移植:取第5代MSCS,将细胞用生理盐水配成1×107/ml的细胞悬液备用。用10μl微量注射器抽取该细胞悬液10μl,并注入含1ml生理盐水的皮试用注射器内,以备移植使用。在造模完成当即,用已备好细胞悬液的皮试针穿刺尾静脉,注入细胞悬液。术后每天每组行BBB评分及爬网格训练。4、取材和检测:各组动物4%多聚甲醛心内灌注固定,取损伤处尾侧脊髓入4%多聚甲醛后固定,修块,30%蔗糖沉底,恒冷切片机作20μm厚的连续冰冻切片,每隔5片取一片组织进行荧光细胞观察,间隔取片后以行抗Fas、Fas-1抗体免疫组织化学ABC染色。在荧光显微镜下观察细胞移植组荧光细胞。在olympus光学显微镜下对脊髓灰质前角进行阳性细胞计数,利用HPLAS-1000高清晰图文分析系统检测Fas、Fas-1凋亡因子免疫阳性反应物的平均灰度值。应用SPSS11.0软件包进行组间多个样本均数比较的单因素方差分析、q检验。 [结果]1.移植细胞观察结果:在静脉移植后1天、3天、7天、14天、21天均可
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