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为了探讨无机盐分、养分及有机质矿化作用对微生物群落结构、多样性和功能微生物丰度影响,河流水土界面微生物群落结构和碳、氮、硫循环功能微生物种群的演替规律,本论文以九龙江、闽江和瓯江三江流域作为研究区域,并增加温室培养实验,对其中水土界面沉积物样品中的理化参数、微生物群落、多样性和功能微生物丰度进行测定;采用基因文库构建技术、变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)和illumina高通量测序技术分析了样品中微生物群落结构及活动规律;利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术对功能微生物进行定量,分析丰度在不同盐分区域的变化规律,进而阐述环境因素和有机质矿化作用对微生物群落结构、多样性及功能微生物丰度影响规律;主要研究结果如下:
1)三江流域水土界面沉积物中,大部分站位Proteobacteria为优势细菌种类,九龙江淡水区域和咸水区域Firmicutes占主要部分;β-proteobacteria随电导率增加而降低,γ-proteobacteria随电导率增加而增加;δ-proteobacteria和ε-proteobacteria在电导率较低的区域存在较少甚至未检测出;
2)瓯江流域微生物群落结构与九龙江和瓯江存在较大差异;功能微生物群落结构在不同流域间存在差异:瓯江流域,产甲烷菌群落结构(基于mcrA基因)与盐度、TN(总氮)、TC(总碳)和NO3--N相关,氨氧化细菌(AOB)群落结构与盐度相关;九龙江和闽江流域,反硝化菌群(基于nirS基因)和异化型硫酸盐还原菌(基于dsrAB基因)群落结构与盐度相关,氨氧化细菌和异化型硫酸盐还原菌群落结构与pH相关,异化型硫酸盐还原菌群落结构与TS(总硫)相关;
3)瓯江流域氨氧化古菌所得9条优势条带经测序比对均与Nitrosopumilus达到97%以上相似度,在系统发育树上与九龙江和闽江氨氧化古菌序列处于不同枝,说明瓯江沉积物中氨氧化古菌与九龙江、闽江沉积物中氨氧化古菌亲缘关系比较远;三江流域所得35条氨氧化细菌优势条带均为β-proteobacteria,其中有五条属于Nitrosomonadaceae;
4)三江流域水土界面沉积物中细菌丰度显著高于占菌丰度,推测在沉积物中细菌为优势微生物,九龙江和瓯江古菌丰度随盐度增加;三江流域氨氧化古菌amoA基因丰度显著高于氨氧化细菌amoA基因,推断沉积物氨氧化过程中,占菌占主导地位;三江流域,nirS和dsrA基因丰度随盐度增加而增加;九龙江、瓯江AOB丰度和相对丰度随盐度增加而增加,AOA仅绝对丰度增加;
5)淡水培养沉积物和咸水培养沉积物中细菌由Actinobacteroa、Bacteroidetes、Chloroflexi、Firmicutes、Nitrospirae、Proteobacteria、Acidobacteria和Cyanobacteria占优势,细菌群落结构存在较大差异;可交换性铁、可交换性亚硝酸盐、可交换性铵盐、氧化还原电位和pH是影响细菌群落结构的主要因素;温室培养增加沉积物中微生物多样性;
6)温室培养试验中,细菌丰度显著高于古菌,古菌在咸水培养沉积物中呈现增加趋势;培养过程中narG基因丰度较稳定,nosZ基因呈现下降趋势,Hzo基因丰度较低;淡水培养沉积物中narG基因和nirS基因显著高于咸水培养沉积物中丰度。