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水貂细小病毒(Mink enteritis virus,MEV)和犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)对水貂具有较强的传染性,感染后所引起的水貂病毒性肠炎和水貂犬瘟热,是危害水貂养殖业最为严重的两种高度接触性传染病。在动物疫病的快速诊断过程中,血清学检测方法具有便捷、稳定、高通量等优点。目前,国内尚无用于检测水貂血清中的MEV和CDV抗体的市售ELISA检测试剂盒,因此本研究旨在建立分别检测MEV和CDV抗体的间接ELISA检测方法,用于MEV和CDV感染或疫苗免疫后抗体的检测。为优化MEV抗体检测方法中使用的最佳包被抗原,本研究分别选取Ultra-15超滤管离心纯化的MEV全病毒、纯化后的重组VP2可溶性蛋白、复性后的重组VP2包涵体蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,对MEV抗体阴、阳性血清进行检测,经比较分析确定重组VP2可溶性蛋白为MEV抗体间接ELISA检测方法中使用的最佳包被抗原,显著优于重组VP2包涵体蛋白(P<0.01)和MEV全病毒(P<0.01)。以纯化的重组VP2可溶性蛋白作为包被抗原,以HRP Goat Anti-Ferret IgG(H+L)为二抗,建立MEV抗体的间接ELISA检测方法,优化该方法的各项反应条件,并对其检测MEV抗体的特异性、敏感性和重复性进行评价,通过酶联免疫单位(enzyme immune units,EIU)计算ELISA抗体效价。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1.425 μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1:80与1:2 000稀释。结果表明,该ELISA方法能够特异地检测MEV抗体,与水貂犬瘟热病毒、水貂阿留申病毒(ADV)的阳性血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于5%;通过比对MEV血清中和抗体和ELISA抗体效价平行关系显示,ELISA抗体效价<14 EIU即为抗体阴性,ELISA抗体效价≥14 EIU时MEV血清中和抗体为阳性。应用水貂犬瘟热-病毒性肠炎二联活疫苗对水貂进行免疫,通过HI试验、SN试验和MEV间接ELISA方法对免疫后不同时间(7 d、14 d、21 d、30 d、60 d、90 d、120 d、180 d)采集的免疫组和对照组水貂血清进行检测,发现三种检测方法所呈现的MEV抗体效价消长规律整体趋于一致;对MEV ELISA抗体效价与中和抗体效价、血凝抑制抗体效价之间的相关性进行分析,发现 MEV ELISA 抗体与 HI 抗体效价(r=0.9369,P<0.001)和 SN 抗体效价(r=0.9461,P<0.001)之间都具有显著的正相关性,说明该方法能够对血清中MEV抗体进行半定量,可替代HI试验和SN试验方法进行水貂病毒性肠炎疫苗免疫效果评价。此外,本研究利用原核表达系统获得CDV重组N可溶性蛋白,纯化后作为包被抗原建立检测CDV抗体的间接ELISA方法,以HRP Goat Anti-Ferret IgG(H+L)为二抗,对该方法的各项反应条件优化并对特异性、敏感性和重复性进行评价,通过临床样品检测评价CDV抗体间接ELISA方法与商品化试剂盒的符合率。结果显示,CDV抗体间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1.383 μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1:80与1:2 000稀释,该ELISA方法能够特异地检测CDV抗体,与MEV、ADV的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10%,与商品化试剂盒检测结果的总符合率为94.4%。