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目的:探讨杨桃根提取物对CCl4诱导小鼠急性肝损伤及大鼠肝纤维化的影响及其潜在作用机制。方法:1.杨桃根提取物对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的预防作用及其机制研究将60只昆明小鼠随机分为6组,分别为正常对照组,0.15%CCl4模型对照组,联苯双酯阳性对照组,杨桃根高、中、低剂量组,每组10只。预防性给予相应药物7天,每天1次。末次给药后1 h,采用一次性腹腔注射法注射0.15%CCl4(10 ml/kg)橄榄油复制急性肝损伤模型。造模后20小时,麻醉小鼠,眼球采血,颈椎脱臼处死,收集血清和肝脏。检测肝功能和炎症标志性指标,肝脏组织抗氧化能力。采用苏木素-伊红(H&E)染色法观察小鼠肝脏组织的病理改变情况。采用western blot法检测肝脏组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),核转录因子-κB(NF-κB),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的蛋白表达水平。2.杨桃根提取物对CCl4诱导大鼠肝纤维化的影响及其作用机制研究适应性喂养一周后,将90只雄性SD大鼠随机分为6组,每组15只。分别为正常对照组,造模组I,II,III,IV,V。第1-8周,除正常对照组按1 ml/kg灌胃给予橄榄油外,其他各组给予等剂量50%CCl4建立肝纤维化模型,连续8周,每周2次。造模期间,分别于第6,7,8周从正常对照组及造模组随机取出1只大鼠,用于检测肝纤维化的形成情况。第9周,再次将造模组随机分为5组,模型对照组,秋水仙碱阳性对照组,EACR高,中,低剂量组,每组14只。另设正常对照组,12只。第9-12周,开始给予相应药物治疗,连续4周,每天1次。给药期间同法造模。检测肝功能和肝纤维化标志性指标,肝脏组织抗氧化能力,观察肝脏组织病理学改变及纤维增生情况。RT-PCR和Western blot检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原(Col-I),转化生长因子β1(TGF-β1),Smad2,Smad4,Smad7,基质金属蛋白抑制剂2(TIMP2)的m RNA及蛋白表达。同时,Western blot检测凋亡相关因子Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3,caspase-3的蛋白表达水平。结果:1.杨桃根提取物对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的预防作用及其机制研究(1)与模型组相比,EACR给药组小鼠血清中的AST,ALT,IL-β1,IL-6水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。(2)与模型组相比,EACR给药组小鼠肝脏中的MDA水平显著降低;SOD,GSH,GSH-Px显著升高(P<0.05或P<0.01)。(3)与模型组相比,EACR给药组小鼠肝脏组织TNF-α,NF-κB,Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。(4)H&E染色结果表明,EACR给药组小鼠肝脏组织病理学改变明显减少。2.杨桃根提取物对CCl4诱导大鼠肝纤维化的影响及其作用机制研究(1)与模型组相比,EACR给药组大鼠肝脏,脾脏指数显著下降,胸腺指数显著升高(P<0.05或P<0.01)。(2)与模型组相比,EACR给药组大鼠血清中ALT,AST,A/G,AKP,HA,LN,ColⅢ,ColⅣ显著降低(P<0.05或P<0.01)。(3)与模型组相比,EACR给药组大鼠肝脏组织中SOD,GSH,GSH-Px,Hyp显著降低,MDA显著升高(P<0.05或P<0.01)。(4)肝脏组织病理学检测发现,EACR给药组大鼠肝脏组织病理学改变及纤维增生明显减少。(5)RT-PCR结果表明,EACR给药组大鼠肝脏组织α-SMA,Col-1a1,TGF-β1,Smad2,Smad4,TIMP1,TIMP2 m RNA表达明显减少,Smad7m RNA表达明显增加(P<0.05或P<0.01)。(6)免疫组织化学染色结果表明,ColⅠ,α-SMA主要在纤维组织表达,TGF-β1,Smad2,Smad4主要在细胞浆表达,Smad7主要在细胞核表达。EACR给药组大鼠肝脏组织中ColⅠ,α-SMA,TGF-β1,Smad2,Smad4表达量显著减少,Smad7表达量显著增多(P<0.05或P<0.01)。(7)Western blot检测结果表明,EACR给药组大鼠肝脏组织α-SMA,TIMP2,TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4,Bax/Bcl-2,cleaved caspase-3/caspase-3表达量显著性减少,Smad7表达量显著增多(P<0.05或P<0.01)。结论:EACR对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠及肝纤维化大鼠具有保护作用,其作用机制与其抑制脂质过氧化,抗炎,抗凋亡,调控TGF-β1/Smads信号通路有关。