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目的:1.通过网络药理学分析,揭示丹龙醒脑方治疗血管性痴呆（Vascular Dementia,VD）的潜在靶点及机制,为实验研究提供理论基础。2.构建及验证VD肾虚血瘀证大鼠模型;证实补肾活血方剂丹龙醒脑方治疗VD肾虚血瘀证大鼠的疗效及是否通过抑制小胶质细胞活化及介导的炎症反应治疗VD肾虚血瘀证大鼠的作用机制。方法:1.网络药理学:通过TCMSP数据库和NPASS数据库筛选丹龙醒脑方的活性成分及靶点基因,通过Dis Ge NET、Gene Cards数据库、OMIM数据库获得VD的疾病靶点,并对丹龙醒脑方靶点与VD疾病靶标进行Venn分析,得到丹龙醒脑方-VD交集靶点,利用STRING数据库构建两者靶点蛋白相互作用（PPI）网络图,并且使用Cytoscape 3.7.1软件进行可视化处理,筛选关键靶点;采用Cytoscape 3.7.1软件构建药物活性成分-作用靶点相互作用网络;运用生物学信息注释数据库（DAVID）对丹龙醒脑方作用靶点进行基因本体（gene ontology,GO）功能富集分析以及基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集分析。2.实验研究:（1）VD肾虚血瘀证大鼠模型的构建及验证:SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组。模型组大鼠采用高脂饮食喂养结合改良双侧颈总动脉永久阻断法（2-VO）及摘除性器官法造模,假手术组仅分离双侧颈总动脉但不结扎。造模结束后,通过Morris水迷宫实验测试两组大鼠行为学改变;观察两组大鼠表征;检测雌二醇（Estradiol,E2）、睾酮（Testosterone,T）、骨钙素（Bone gla protein,BGP）、Ca、血液流变学、内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）、一氧化氮（Nitric oxide,NO）等指标变化,验证VD肾虚血瘀证大鼠模型的建立。（2）治疗实验:为证实丹龙醒脑方治疗VD肾虚血瘀证大鼠的疗效及是否通过抑制小胶质细胞活化及介导的炎症反应治疗VD肾虚血瘀证大鼠的作用机制,SD雄性大鼠按随机数字表法分为6组,分别为假手术组、模型组、丹龙醒脑方低剂量组（DLXNF-L）、丹龙醒脑方中剂量组（DLXNF-M）、丹龙醒脑方高剂量组（DLXNF-H）、尼莫地平组。采用Morris水迷宫实验观察各组大鼠行为学的改变;通过HE染色观察各组大鼠海马组织形态学变化;检测E2、T、BGP、Ca、血液流变学、ET-1、NO等指标变化;采用ELISA检测各组大鼠海马组织的炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量;运用免疫组化法、Westernblot法检测各组大鼠海马组织中Iba-1蛋白的表达;运用免疫组化法、Westernblot法、RT-q PCR法检测各组大鼠海马组织中HMGB1、RAGE、NF-κB、Regnase-1蛋白及m RNA表达。结果:1.网络药理学分析:1)PPI网络分析结果显示HMGB1、AGER（RAGE）、NLRP3、APP、CASP3、ICAM1等10个靶点可能是丹龙醒脑方治疗VD的关键靶点;2)GO生物过程分析显示丹龙醒脑方治疗VD的基因功能主要体现在炎症反应、小胶质细胞分化、对炎症反应的调节、神经元凋亡过程等生物过程;3)丹龙醒脑方治疗VD关键靶点的KEGG通路富集分析显示居前二位的信号通路是AGE-RAGE信号通路和NF-κB信号通路。2.实验研究:（1）VD肾虚血瘀证大鼠模型的构建及验证:（1）两组大鼠的表征结果:与假手术组比较,模型组大鼠表征具有体毛干枯发黄无光泽,精神萎靡,眯眼畏光,对外界刺激反应迟钝伴活动减少,卷缩拱背,喜扎堆,食欲减退,体重增长显著缓慢,大便稀,尾巴有紫或黄褐色的瘀斑,舌质紫暗等肾虚血瘀证特点;（2）两组大鼠Morris实验水迷宫结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长（P＜0.01）;穿越平台次数和目标象限停留时间明显缩短（P＜0.01）;（3）两组大鼠血液流变学结果:与假手术组比较,模型组大鼠全血粘度低切、中切、高切、血浆黏度均显著升高（P＜0.01）;（4）两组大鼠血清E2、T、BGP、Ca、ET-1、NO水平比较:与假手术组比较,模型组大鼠E2、T、BGP、Ca、NO水平显著降低（P＜0.01）,ET-1水平明显升高（P＜0.01）。（2）治疗实验:（1）各组大鼠的表征结果:与模型组比较,丹龙醒脑方各组及尼莫地平组一般情况有所改善,体毛柔软有光泽,自主活动增多且反应较前灵敏,食欲逐渐恢复,大便由稀溏转为正常,尾巴紫或黄褐色的瘀斑减少,舌质鲜红。（2）各组大鼠Morris水迷宫实验结果:与模型组比较,丹低组、丹中组及尼莫地平组的逃避潜伏期缩短（P＜0.05）,丹高组的逃避潜伏期显著缩短（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组的逃避潜伏期有所缩短（P＜0.05）,丹低组、丹中组的逃避潜伏期与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。与模型组比较,丹低组、丹中组及尼莫地平组的穿越平台次数及目标象限停留时间增加（P＜0.05）,丹高组穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组的穿越平台次数及目标象限停留时间有所增加（P＜0.05）,丹低组、丹中组的穿越平台次数及目标象限停留时间与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。（3）各组大鼠海马CA1区HE染色结果:与模型组比较,丹低组、丹中组、丹高组以及尼莫地平组均可减轻大鼠海马CA1区的病理改变,其中丹高组优于丹低组、丹中组和西药组。（4）各组大鼠血液流变学结果:与模型组比较,丹低组、丹中组及尼莫地平组的全血粘度低切、中切、高切、血浆黏度均降低（P＜0.05）,丹高组全血粘度低切、中切、高切、血浆黏度均显著降低（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组的全血粘度低切、中切、高切、血浆黏度有所降低（P＜0.05）,丹低组、丹中组的全血粘度低切、中切、高切、血浆黏度与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。（5）各组大鼠血清E2、T、BGP、Ca、ET-1、NO水平比较:与模型组比较,丹低组、丹中组及尼莫地平组E2、T、BGP、Ca、NO水平升高（P＜0.05）,ET-1水平降低（P＜0.05）,丹高组E2、T、BGP、Ca、NO水平显著升高（P＜0.01）,ET-1水平显著降低（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组E2、T、BGP、Ca、NO水平有所升高（P＜0.05）,ET-1水平有所降低（P＜0.05）,丹低组、丹中组E2、T、BGP、Ca、NO、ET-1水平与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。（6）各组大鼠炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量比较:与模型组比较,丹低组、丹中组及尼莫地平组的IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低（P＜0.05）,丹高组的IL-1β、IL-6、TNF-α含量均显著降低（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组的IL-1β、IL-6、TNF-α含量均有所降低（P＜0.05）,丹低组、丹中组的IL-1β、IL-6、TNF-α含量与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。（7）免疫组化、Western blot检测各组大鼠Iba-1蛋白表达结果:与模型组比较,丹低、丹中及尼莫地平组的Iba-1蛋白表达水平降低（P＜0.05）,丹高组的Iba-1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组的Iba-1蛋白表达水平有所降低（P＜0.05）,丹低组、丹中组Iba-1蛋白表达水平与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。（8）免疫组化、Western blot及RT-q PCR检测各组大鼠HMGB1、RAGE、NF-κB及Regnase-1表达水平:与模型组比较,丹低、丹中及尼莫地平组的HMGB1、RAGE、NF-κB蛋白及m RNA表达水平降低,Regnase-1蛋白及m RNA表达水平升高（P＜0.05）,丹高组的HMGB1、RAGE、NF-κB蛋白及m RNA表达水平显著降低,Regnase-1蛋白及m RNA表达水平显著升高（P＜0.01）;与尼莫地平组比较,丹高组的HMGB1、RAGE、NF-κB蛋白及m RNA表达水平有所降低,Regnase-1蛋白及m RNA表达水平有所升高（P＜0.05）,丹低组、丹中组的HMGB1、RAGE、NF-κB及Regnase-1表达水平与尼莫地平组无明显差异（P＞0.05）。结论:1)网络药理学分析表明丹龙醒脑方治疗VD是多成分-多靶点-多通路协同作用;HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路及小胶质细胞活化及介导的炎症反应在丹龙醒脑方治疗VD过程中可能发挥了十分重要的作用。2)采用高脂饮食喂养结合改良（2-VO）法及摘除性器官法成功构建了VD肾虚血瘀证大鼠模型。3)丹龙醒脑方可改善VD肾虚血瘀证模型大鼠的认知功能障碍、海马组织病理损伤及“肾虚血瘀”病机的微观指标。其中以丹龙醒脑方高剂量组治疗效果最为显著。4)丹龙醒脑方可能是通过抑制VD肾虚血瘀证模型大鼠HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路的激活及提高Regnase-1的表达,进而抑制小胶质活化及介导的炎症反应,从而发挥治疗VD的作用。其中以丹龙醒脑方高剂量组治疗效果最为显著。