犬瘟热(canine distemper, CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus, CDV)引起的一种急性高度接触传染性病。近年来其自然感染宿主范围不断扩大,除了犬和毛皮动物外,还可以感染狮、虎、灵长类等多种动物。已建立犬瘟热病毒的检测方法有电子显微镜技术、IFA、 ELISA、RT-PCR等,但因耗时长,操作繁琐,需要特殊仪器等因素没能广泛用于临床诊断。另外,在一些国家和地区出现免疫犬感染犬瘟热的病例报道,可能是流行毒株与疫苗株不匹配,造成疫苗免疫失败。卵黄抗体作为一类高效生物制剂在防治动物疾病中显示了明显的效果,为犬瘟热防治提供了新的思路。本研究首先从感染CDV病犬的内脏器官分离得到了3株病毒,分别命名为J7、A8、S9。对CDV H基因扩增测序,进行了核苷酸、氨基酸同源性和系统进化分析。结果表明：3株分离株核苷酸的同源性为99.1～99.3%,分离株与A75/17毒株同源性最高,与疫苗株Onderstepoor、CDV3同源性最低,与临床常用犬瘟热疫苗同源性差异较大。系统进化树分析表明,分离株与5804P、5804株亲源关系较近,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3亲源关系最远。将分离株与CDV7个基因型代表进行核苷酸同源性分析,与国内分离的Asia-1型HLJ3-08同源性最高,为99.2%～99.3%。分离株与Europe型、America-2型、European wildlife型、Asia-2型、Arctic-like型、Vaccine型同源性逐渐降低,分离株属于Asia-1型。分离株H基因编码607个氨基酸,含有9个潜在的N-联糖基化位点,疫苗株Convac、Onderstepoort的糖基化位点有7个和4个,临床常用犬瘟热疫苗糖基化位点为6-7个。本研究建立了CDV环介导等温扩增(LAMP)检测方法。根据CDV N基因保守序列设计合成内引物(FIP,BIP)、外引物(F3,B3)。分别进行了反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及临床样品检测。结果显示,该方法63℃水浴1h即可完成反应,可以检测到最低cDNA的浓度大约为9.6×10-5pg/μl,分别比RT-PCR和CDV胶体金试纸条检测方法灵敏10和1000倍。同时对狂犬病毒(RV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒Ⅱ型(CAV Ⅱ)、CDV进行LAMP方法扩增,仅CDV为阳性结果。用已建立的LAMP方法检测临床样品,检测结果与RT-PCR方法符合率为100%,说明本方法特异,灵敏,可用于CDV快速检测。本研究利用表位串联技术,采用大肠杆菌原核表达系统,获得CDV F基因B细胞线性表位重组蛋白。将表位串联重组蛋白、CDV-J7株、CDV-11株3种抗原作为免疫原对7月龄海兰蛋鸡进行免疫。共免疫3次,每次间隔2周。串联表位重组蛋白组,一免、二免、三免剂量分别为0.4mg/只、0.6mg/只、0.8mg/只；CDV-J7株组,一免、二免、三免剂量均为3.0ml/只(103.5TCID50/ml); CDV-11株组,一免、二免、三免剂量均为3.0ml/只(104.5TCID50/ml)。采用氯仿抽提法提取卵黄抗体,间接ELISA法检测抗体效价。3种不同抗原卵黄抗体ELISA效价最高值分别为1:2048、1:512、1:256。体外中和试验结果显示,卵黄抗体原液中和CDV能力较差,随浓缩倍数增加(5和10倍),卵黄抗体中和CDV能力增强,24h内对细胞有保护作用,48h细胞病变开始明显。未接毒MDCK细胞生长正常,非免疫卵黄抗体产生细胞病变,高免卵黄抗体对细胞几乎无损伤作用。体内中和试验表明,5倍浓缩卵黄抗体对颅内接种CDV的昆明鼠产生保护作用。本研究结果表明,分离的3株病毒属于CDV Asia-1型。所建立的LAMP检测方法具有灵敏、特异、简便的特点,有利于CDV的快速检测。串联表位重组蛋白制备的高免卵黄抗体对CDV有一定中和作用,为CD的特异性防治提供了物质基础,并为下一步的临床应用提供了实验基础。