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肥胖及其引起的代谢性疾病是目前全球面临的公共健康问题,但仍缺乏安全有效的防治方法。线粒体解偶联蛋白1(uncouplingprotein1,UCP1)因为其在能量代谢、能量平衡和白色脂肪棕色化中的重要作用而成为肥胖防治的新靶点。基因序列分析证实,UCP1基因的启动子区域富含鸟嘌呤G,能够形成G-四链体结构,可能影响UCP1基因启动子的活性及其表达。
本文首先考察了黄连碱/黄连素与UCP1基因启动子核苷酸片段形成的G-四链体(G-quadruplex)之间的相互作用。通过紫外扫描、荧光光谱、圆二色谱、分子对接和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法证实,黄连碱/黄连素与UCP1基因启动子核苷酸片段形成的G-四链体存在相互作用,可促进其构型从分子内G-四链体向分子间G-四链体转化。
然后,本文用双荧光素酶报告基因实验考察了黄连碱/黄连素对UCP1启动子活性的影响,结果显示,黄连碱/黄连素可直接影响UCP1启动子活性。同时,qRT-PCR和免疫印迹实验表明,黄连碱/黄连素可时间和剂量依赖地上调分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中UCP1的表达。
另外,油红染色发现,黄连碱/黄连素可抑制分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中脂滴积累;免疫荧光结果显示黄连碱/黄连素在诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中UCP1的表达的同时还会明显提高细胞中线粒体数量。
上述实验结果表明,黄连碱/黄连素可通过改变UCP1基因启动子G-四链体的构型影响其启动子活性、调节UCP1表达,同时抑制分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中脂滴形成、增加分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中线粒体数量,具有诱导白色脂肪棕色化的潜力,在肥胖的防治中有一定的应用开发价值。
本文首先考察了黄连碱/黄连素与UCP1基因启动子核苷酸片段形成的G-四链体(G-quadruplex)之间的相互作用。通过紫外扫描、荧光光谱、圆二色谱、分子对接和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法证实,黄连碱/黄连素与UCP1基因启动子核苷酸片段形成的G-四链体存在相互作用,可促进其构型从分子内G-四链体向分子间G-四链体转化。
然后,本文用双荧光素酶报告基因实验考察了黄连碱/黄连素对UCP1启动子活性的影响,结果显示,黄连碱/黄连素可直接影响UCP1启动子活性。同时,qRT-PCR和免疫印迹实验表明,黄连碱/黄连素可时间和剂量依赖地上调分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中UCP1的表达。
另外,油红染色发现,黄连碱/黄连素可抑制分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中脂滴积累;免疫荧光结果显示黄连碱/黄连素在诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中UCP1的表达的同时还会明显提高细胞中线粒体数量。
上述实验结果表明,黄连碱/黄连素可通过改变UCP1基因启动子G-四链体的构型影响其启动子活性、调节UCP1表达,同时抑制分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中脂滴形成、增加分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中线粒体数量,具有诱导白色脂肪棕色化的潜力,在肥胖的防治中有一定的应用开发价值。