戊型肝炎病毒（HEV）是通过粪-口途径传播的无包膜、正链RNA病毒。它能引起大规模爆发性流行，也可引起急性散发性肝炎。目前戊肝的诊断主要是通过ELISA（酶联免疫法）检测抗HEV抗体，但因为HEV感染窗口期或患者自身免疫体制以及EIA试剂本身的原因等都会给戊肝的诊断带来难度；HEV RNA检测是判断HEV病毒是否存在的标准之一，但常规RT-PCR方法操作繁琐、容易污染、敏感性低，鉴于此本课题建立了一种快速、敏感、特异性强的实时荧光RT-PCR方法来检测戊型肝炎病毒。 本研究在建立实时荧光RT-PCR方法时，首先根据ORF3保守区域（5487—5613nt）设计了26条引物和4条探针，通过对引物和探针的筛选，确定了最佳的引物（401U／402R）和探针（301F）组合，并通过对引物、探针用量的优化确定40μl体系上下游引物用量分别为4pmol和8pmol，探针用量为8pmol；其次，通过对反应体系和条件进行优化，确定了Taq酶用量为4U、AMV逆转录酶的用量为2U、逆转录温度为50℃、PCR扩增采用三步法等；最后，通过对HEV RNA抽提试剂进行比较，选择使用QIAamp Viral RNA Mini Kit抽提HEV RNA。用建立的荧光PCR方法对9个不同浓度的假病毒稀释物进行了检测，结果显示，本套试剂的检测范围为5.6×10³～5.6×10¹⁰copies，最低可检测5.6×10³copies的假病毒分子，标准曲线的线性相关系数也较好，其为0.9968。 用该方法对149份临床急性肝炎患者血清进行检测，结果有65例为HEV