紫杉醇(Taxol)是从紫杉树皮中分离提取到的天然抗肿瘤物质，是迄今为止最具抗癌活性的天然化合物之一，紫杉酚能够抑制细胞在G2-M期增殖,阻断有丝分裂，从而有效抑制癌细胞增生。然而紫杉醇在植物体内含量相当低，加之其生长缓慢，这对紫杉醇的进一步开发利用造成了很大的困难。紫杉烷13α–羟基化酶(Taxane13α-hydroxylase）属于依赖细胞色素P450的单加氧酶，为紫杉醇合成途径的关键羟化酶，是紫杉醇及其半合成前体生物合成调控的十分重要的靶标。本研究克隆得到我国东北红豆杉（Taxus cuspidata）紫杉烷13α-羟基化酶基因，构建了其植物表达载体并转化烟草。在此基础上克隆了几个可能与紫杉烷13α-羟基化酶基因相作用的microRNA(miRNA)基因，构建其植物表达载体并进行了其中miRNA基因与紫杉烷13α-羟基化酶基因共转化试验。主要研究内容和研究结果如下：　　（1）本研究克隆得到东北红豆杉13OH的基因全长，将它与报道的13OH基因进行同源性比较后发现9个碱基有差异，同源性为99.38％。　　（2）根据不同的报告基因要求，成功构建了13OH基因在 Pcambia1305.1和pcambia1304及pEGAD上的三种植物表达载体，分别含有GUS基因、GUS和mGFP5、EGFP作为报告基因。　　（3）将构建在Pcambia1305.1的13OH基因成功转化到烟草中，获得可在烟草中表达13α-羟基化酶基因的转基因烟草植株。　　（4）从水稻及拟南芥中克隆出miR160e、miR164e、miR165a、miR166m、miR169d小调节子前体，测序结果表明除164e有一个碱基差异166m有两个碱基差异外，其余同源性为100%。　　（5）分别构建了miR160e、miR164e、miR165a、miR166m、miR169d在Pcambia1305.1上和miR165a、miR169d在pEGAD上的七种植物表达载体，便于不同的筛选。　　（6）瞬时转化GUS染色结果显示miR169d对13OH基因的表达有很强的抑制作用。　　（7）荧光定量PCR结果显示miR165a可能对13OH基因有小幅度的影响。