林麝养殖场铜绿假单胞菌的分布调查及抗菌消毒药物的筛选

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本研究从陕西省镇坪县逢春林麝养殖中心采集土壤、水、空气、动物体表、粪便和尿等样品52份,其中从土壤、卧台、粪便、鼻黏液、尿和伤口共6种样品中检出16份样品中含铜绿假单胞菌。通过对样品中细菌总数和铜绿假单胞菌数的分析,发现在粪便、伤口、土壤和鼻黏液中铜绿假单胞菌数最多,平均含菌量在106-1010CFU/g或mL之间。对分离菌株运用常规细菌学和16SrRNA方法进行鉴定,发现来自粪便、尿、土壤、卧台和鼻黏液的14株分离菌为革兰氏阴性短杆菌,产生水溶性绿色色素,来自伤口的2株分离菌为革兰氏阴性中长杆菌,不产生水溶性绿色色素,16株菌主要细菌生化试验结果与文献报道的一致,16株菌的16SrRNA目标片段测序结果与标准株的同源性在99%以上。因此,最终确定这16株细菌为铜绿假单胞菌,编号为PAsp-4至PAsp-19。小鼠毒力试验(LD50)显示,来源动物体(伤口、粪便、鼻黏液和尿液)的菌株毒力远远大于从养殖场环境(土壤和卧台)分离的菌株,前者的LD50约为106CFU,后者为108-109CFU之间。药敏纸片试验结果显示,分离的16株铜绿假单胞菌均对环丙沙星、氧氟沙星、丁胺卡那、阿洛西林、头孢砒亏和亚胺培南敏感;对头孢哌酮、庆大霉素、链霉素和多粘霉素B中度敏感;对羧苄青霉素、头孢唑啉、氨苄西林、红霉素、四环素、复方新诺明、头孢呋辛和氟苯尼考不敏感。比较养殖场使用的7种抗生素(环丙沙星、庆大霉素、四环素、链霉素、羧苄西林、氟苯尼考和复方新诺明)的MIC值后发现,环丙沙星MIC值最小,为0.15625-0.625μg/mL,庆大霉素为2.5-10μg/mL,链霉素为20-160μg/mL,氟苯尼考为160-640μg/mL,四环素为64-512μg/mL,羧苄西林为160-1280μg/mL,复方新诺明在溶解度达到饱和时仍没有抑菌作用。因此,环丙沙星是治疗该场铜绿假单胞菌感染的首选药物。按照GB15981-1995规定的消毒剂消毒效果评价与标准,对养麝场使用的过氧乙酸、次氯酸钠、碘伏和苯扎溴铵4种消毒剂的消毒效果进行评价,发现5%过氧乙酸的消毒效果最好,作用10mmin后,对1.5×104CFU/ml新鲜菌液杀菌率达到100%。
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