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目的:
研究核转录因子NAC1(伏隔核1,Nucleus accumbens-1)对肿瘤细胞治疗敏感性的调控机制,以及对肿瘤形成和恶性进展的影响。
方法:
采用细胞生物学、分子生物学、药理学和动物实验学等多种方法检测:
1) NAC1对细胞自噬的调控作用以及NAC1介导的自噬对临床化疗药物顺铂敏感性的影响;
2)NAC1对细胞衰老的调控作用以及NAC1介导的细胞衰老逃逸对肿瘤细胞增殖,以及细胞恶性转化和致瘤性的影响。
结果:
本研究发现:
1)NAC1是一个全新的自噬调节因子。在顺铂治疗下,NAC1可引起自噬相关蛋白LC3Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3)水平上调、p62蛋白(它可参与自噬途径降解)水平下调、GFP-LC3荧光颗粒数以及细胞自噬小体增加。抑制NAC1介导的自噬激活可增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性,表现为细胞活力减弱、凋亡细胞数增加,以及凋亡相关蛋白—剪切的Caspase 3和PARP水平上调。本研究揭示,NAC1介导的自噬激活是通过调控高迁移率族蛋白HMGB1的表达、易位和释放而实现的。NAC1可促进顺铂治疗产生的HMGB1从胞核到胞浆的易位以及HMGB1从胞浆向胞外的释放。在顺铂治疗下,沉默HMGB1的表达则可明显抑制NAC1介导的自噬激活。
2)NAC1亦是一个全新的细胞衰老抑制因子。NAC1可逃逸辐射和致癌因子诱导的细胞衰老发生,其表现为SA-β-gal阳性细胞数减少、细胞增殖能力和细胞克隆形成数增加、细胞周期蛋白依赖激酶抑制蛋白-p21表达下调。RT-PCR和荧光素酶报告基因检测结果显示,NAC1通过调控ΔNp63(DeltaNp63为p63蛋白的主要表达形式)转录来逃逸辐射和致癌因子诱导的细胞衰老,促进肿瘤细胞的增殖,从而有利于致癌因子Ras诱导的MEF细胞的恶性转化,并在动物模型中促发肿瘤的形成。
结论:
NAC1通过影响HMGB1的表达、易位和释放介导自噬激活,并参与肿瘤细胞对化疗药物顺铂敏感性的调控;在辐射和致癌因子刺激下,NAC1通过影响ΔNp63转录水平的活性抑制细胞衰老发生并在促肿瘤细胞增殖、MEF细胞的恶性转化和肿瘤形成过程中起着重要的作用。以上这些发现有助于我们进一步了解核转录因子NAC1在肿瘤发生发展中的分子和细胞功能,并为肿瘤的预防和治疗提供了一个新的可能的潜在靶点。