【摘 要】
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目的通过建立2型糖尿病动脉粥样硬化动物模型,研究APN对球囊成形术后病理生理改变的影响,探讨APN保护内皮细胞、促进再内皮化、减少再狭窄发生的作用,以明确应用APN干预减少成形术后再狭窄的可行性及其作用机制。方法1、建模与分组所有实验动物建立2型糖尿病AS模型,对AS形成的病变段血管行PTA手术,随机分为APN实验组和对照组(8只/组),实验组予补充脂联素,对照组予注射生理盐水,隔日1次,共3次。
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目的通过建立2型糖尿病动脉粥样硬化动物模型,研究APN对球囊成形术后病理生理改变的影响,探讨APN保护内皮细胞、促进再内皮化、减少再狭窄发生的作用,以明确应用APN干预减少成形术后再狭窄的可行性及其作用机制。方法1、建模与分组所有实验动物建立2型糖尿病AS模型,对AS形成的病变段血管行PTA手术,随机分为APN实验组和对照组(8只/组),实验组予补充脂联素,对照组予注射生理盐水,隔日1次,共3次。第70天两组动物行血管造影检查了解血管通畅情况及狭窄程度,获取血液及组织标本进行病理观察及分子生物学分析。2、血清指标的检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density 1ipoprotein cholesterin,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein cholesterol,HDL)、一氧化氮(nitric oxide,NO)及APN。3、血管组织病理学分子生物学检测伊文氏兰染色观察再内膜化程度;HE染色观察血管壁的一般形态改变、Mavot染色观察泡沫细胞的分布、血管平滑肌细胞及胶原蛋白增生等;PCNA免疫组化分析细胞增殖情况;油红O染色观察脂质沉积情况;免疫荧光检测活性氧簇和线粒体DNA的损伤;蛋白印迹法(Western-Blot,WB)检测胞浆细胞色素C(cyt-C,cyt-C)。应用Image-Pro Plus 6.0进行图像分析,spss 25.0进行统计学分析。结果对照组血糖、TC、TG、LDL高于实验组(P<0.05),短期内HDL变化不大,未见显著统计学差异(P>0.05),ELISA检测血清APN及NO浓度干预组高于对照组(P<0.05),伊文氏兰染色见实验组再内膜化面积大于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)图像分析血管狭窄程度,实验组血管再狭窄程度小于对照组(P<0.05)。HE染色对照组内膜厚度较试验组明显增厚,增厚内膜层见大量泡沫细胞,Mavot染色分析内-中膜厚度(intima-media thickness,IMT)比、增厚内膜面积、内膜纤维组织含量实验组小于对照组,实验组内中膜增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear,PCNA)数量小于对照组(P<0.05)。ROS及MtDNA荧光分析见APN实验组内膜层ROS含量、MtDNA损伤较对照组少(P<0.05),油红O染色实验组内膜层脂质成分含量较对照组少(P<0.05),Western-Blot检测胞浆Cyt-C结果示实验组小于对照组(P<0.05),说明实验组ROS累积量及线粒体损伤较对照组少。结论成形术造成的内皮损伤是导致再狭窄的重要原因之一,APN可通过调节代谢减轻线粒体氧化损伤,进一步保护了内皮细胞,促进再内膜化以减少术后血管的再狭窄的发生。
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