论文部分内容阅读
组蛋白共价修饰是真核生物基因表达调控的重要方式，如赖氨酸的甲基化和乙酰化。p300/CBP相关因子PCAF(p300/CBP associated factor)和共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1CARM1(Coactivitor-Associated ArginineMethyltransferase1)作为组蛋白乙酰转移酶和甲基转移酶的重要成员，与其它功能性蛋白合作，在细胞周期、肿瘤发生、信号转导、激素调节、DNA损伤修复中发挥重要作用。腺病毒早期区域1A蛋白E1A（Edenoviral early region1A protein）调控PCAF对H3K9、K14的乙酰化修饰，但具体的调控机制仍存在争议。有报道表明E1A CR1(Conserved region1)与PCAF组蛋白乙酰转移酶结构域HAT(histone acetyltransferase)相互作用。而我们证明与CR1相比，E1A无规则但相对保守的N端33个氨基酸残基组成的NR结构域(Conserved N-terminalRegion，1-33)，与HAT有更高的亲和力。生化实验表明，NR竞争性地结合到Acetyl-CoA结合口袋，抑制PCAF HAT活性。我们通过计算机模拟的PCAF与E1A NR对接模型(docking model)和点突变实验结果共同阐述了E1A通过与Acetyl-CoA竞争性地结合PCAF，从而抑制其HAT活性。有报道表明，CARM1通过HAT结构域和PCAF相互作用，更重要的是CARM1甲基化修饰H3R17，但其底物结合的特异性尚不清楚。由GST-pulldowm实验我们发现CARM1和PCAF之间存在明显的相互作用，但最终未能得到两者的复合物晶体。通过对CARM1与H3复合物的分析，我们在CARM1底物结合的特异性方面有了新的认知。