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目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂与紫杉醇联合应用,协同抑制NSCLC细胞系的作用和机制。 方法:1.采用体外药物敏感试验(MTT比色法),分别观察不同给药时间TSA、DP和紫杉醇协同对NSCLC细胞系A549、H322及H1299的抑制作用;实验共分设10组:①正常对照组(control);②紫杉醇96h组(TAX):③DP12h组(DP);④DP作用12h后换为紫杉醇84h组(DF),12h时换培养液;⑤DP与紫杉醇同时加用组(DTST),DP与紫杉醇同时加入培养基中,12h换液,去除DP,紫杉醇继续作用84h;⑥紫杉醇作用84h后换为DP作用12h组(DB),84h时换培养液;⑦7SA12h组(TSA);⑧TSA作用12h换为紫杉醇84h组(TF),12h时换培养液;⑨TSA+紫杉醇同时加用组(TTST),TSA作用12h,紫杉醇再作用84h,12h时换培养液;⑩紫杉醇作用84h后换为TSA作用12h组(TB),84h时换培养液;联合用药时每孔TSA用药浓度为300nM,DP用药浓度为25ng/ml,观察TSA、DP分别与紫杉醇联合应用对H1299和H322细胞系的协同抑制效果。2.采用流式细胞仪检测TSA、DP分别与紫杉醇联合应用早期对H1299和H322细胞系的细胞周期、细胞凋亡的变化。分组方法同方法1,紫杉醇作用时间调整为24h。TSA用药浓度为300nM,DP用药浓度为25ng/ml,紫杉醇用药浓度为10uM。3.采用Western免疫印迹法检测联合应用早期p21、Survivin、磷酸化ERK以及PARP蛋白的表达变化,按方法2的分组进行。另外还检测了A549、H322及H1299细胞系的HER2表达水平。5.荧光显微镜下观察按方法3的分组方法,各组Hoechst染色后细胞核的变化,了解凋亡和细胞死亡情况。 结果:1.NSCLC 3种细胞系HER2蛋白表达水平不同,表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299。2.HDAC抑制剂TSA、DP对体外培养的3种NSCLC细胞系均具有生长抑制作用,并且这种抑制作用呈现时间