论文部分内容阅读
背景和目的脑缺血预处理(ischemic preconditioning, IP)是指机体对短暂性缺血的适应性反应,能增强神经元对再次缺血的耐受性。脑缺血预处理对脑缺血损伤的内源性保护涉及多种分子机制,有自由基、细胞代谢产物、兴奋性神经递质、腺苷、热休克蛋白及钙超载等学说,但其确切的机制目前仍不清楚。有研究表明,高压氧预处理可抑制大脑皮质Nogo-A及NgR的表达,从而可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤时的认知功能。Nogo-A是目前已知最强的轴突生长抑制因子,在髓鞘损伤后具有强烈的抑制轴突再生作用,NgR (Nogo receptor)是其受体,介导神经生长抑制作用,是影响神经修复的重要通路。有研究表明大鼠脑缺血缺氧后Nogo-A及NgR表达均增高,强烈抑制神经纤维的再生,从而导致神经功能的下降。然而,脑缺血预处理能否通过抑制Nogo-A及NgR的表达来对脑缺血损伤起保护作用,目前尚未见报道。本研究通过建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,来观察脑缺血预处理后不同时间点Nogo-A及受体NgR的表达,探讨脑缺血预处理能否通过抑制Nogo-A及NgR的表达来对脑缺血损伤产生保护作用。方法健康雄性的SD大鼠108只,随机分为三组：假手术组(sham-operated, S)组,缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)组和缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)组,每组取缺血再灌注1d、3d及7d3个时间点,分成3个亚组,每个亚组12只大鼠。线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,脑缺血预处理10min,3d后进行再次缺血2h,各组再灌注1d、3d及7d后处死大鼠取脑组织,采用免疫组化染色检测大鼠缺血侧皮质Nogo-A及NgR蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测大鼠缺血侧皮质Nogo-A mRNA的表达。结果1.神经功能缺损评分假手术组大鼠无神经功能缺损,I/R组与IP组均有不同程度的神经功能缺损,IP组神经功能缺损较I/R组能明显改善,神经生物学评分有显著差异(p<0.05)。2. Nogo-A免疫阳性细胞的变化情况假手术组在缺血皮质区域见有少量的胞浆染色的Nogo-A阳性细胞。而在I/R组,缺血皮质区域可见有较多的胞浆染色深的Nogo-A阳性细胞,且以3d为最多,与假手术组比较具有统计学差异(P<0.05)；实施预处理后,缺血侧皮质Nogo-A阳性细胞数较I/R组有所降低,与I/R组相应亚组比较具有统计学差异(P<0.05)。3.NgR免疫阳性细胞的变化情况假手术组在缺血皮质区域见有少量的胞浆染色的NgR阳性细胞。而在I/R组,缺血皮质区域可见有较多的胞浆染色深的NgR阳性细胞,且以3d为最多,与假手术组比较具有统计学差异(P<0.05)；实施预处理后,缺血侧皮质NgR阳性细胞数较I/R组有所降低,与I/R组相应亚组比较具有统计差异(P<0.05)。4. Nogo-AmRNA的表达变化情况假手术组在缺血皮质区见有少量的Nogo-A mRNA的表达。而在I/R组,缺血皮质区域可见有较多的Nogo-AmRNA表达,且以3d为最多,与假手术组比较具有统计学差异(P<0.05)；实施预处理后,缺血侧皮质Nogo-AmRNA表达较I/R组有所降低,与1/R组相应亚组比较具有统计学差异(P<0.05)。结论1.脑缺血再灌注后大鼠缺血皮质Nogo-A及NgR表达增高,提示二者在脑缺血早期均参与了抑制神经再生的作用。2.脑缺血预处理对大鼠脑内Nogo-A及NgR表达有明显的抑制作用,推测脑缺血预处理可能通过下调Nogo-A及NgR的表达对脑缺血损伤产生保护作用。