菟丝草抗高脂血症活性部位的制备及质量标准研究

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高脂血症(HLP)是一种与脂代谢紊乱相关的疾病,若该症状持续高发,将会引发其它心脑血管疾病。临床上,常采用他汀类、胆汁酸螯合剂等西药进行治疗,但因其在治疗过程中会有治疗抵抗、不耐受等表现;研究者们将中药作为治疗高脂血症的新方向,菟丝草为旋花科植物菟丝草Cuscuta chinesis Lam.(CCL)的干燥地上部分。在《神农本草经》中首次记载,并将其列为上品。菟丝草具有保护眼睛、延缓衰老、提高生育能力等功效,主治黑胆质性或异常黏液质性疾病,如寒性抑郁症、失眠等症状。课题组前期研究表明菟丝草具有降血脂活性,国内外研究多将其作为降血脂复方中的组方药材。但有关菟丝草全草的物质基础、降血脂作用机制方面不够深入。为此,本文以菟丝草为研究对象,对其进行化学成分分析,制备其活性部位并进行质量标准研究,初步推测并验证其降血脂作用机制,其主要内容包括:第一部分介绍了高脂血症的病因以及其西药、中药治疗等;简单描述了菟丝草植物化学成分及药理作用;从指纹图谱、含量测定等方面列举了液质联用技术在中药质量控制中的相关应用。第二部分建立了不同寄主菟丝草指纹图谱。通过HPLC-Q-TOF-MS技术对菟丝草进行化学成分分析,共鉴定出67种化学成分,包括肉桂酸类衍生物3个;生物碱类4个;酚酸及其衍生物8个;苯丙素类14个;黄酮类29个以及其他类化合物7个,进一步丰富了菟丝草的物质基础。第三部分是以金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷及槲皮素等为指标成分,结合单因素、正交试验,将菟丝草活性部位最佳提取工艺确定为:料液比为1:18,乙醇浓度为70%,提取时间为1 h,提取次数为3次;在此基础上,借助大孔吸附树脂试验,对上样浓度、洗脱乙醇浓度等工艺参数的考察,确定其最佳纯化工艺:上样浓度为0.4 g·mL-1溶液,以3 BV·h-1吸附,上样量和除杂用水量均为4 BV,最后用5 BV的70%乙醇洗脱,收集该洗脱液。经处理,即得菟丝草活性部位。第四部分通过鉴别、检查以及含量测定等研究,对菟丝草活性部位进行质量评价。第五部分借助中药系统药理学、蛋白分析等数据库预测菟丝草抗HLP作用机制,通过CytoNCA插件对菟丝草治疗高脂血症的共有靶点连接菟丝草化学成分将初始网络标准化,利用细胞实验验证。结果表明,从菟丝草中筛选出抗HLP的槲皮素、芹菜素等6个核心靶点,并表示菟丝草可能通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路作用于HLP;细胞实验表明,与空白对照组相比,模型组PI3K和GSK3β的mRNA水平显著升高(P<0.01),AKT1的mRNA水平显著降低(P<0.01);加入菟丝草后,中、高剂量组PI3K和GSK3β的基因(蛋白)的表达水平随给药剂量的增加而下降,具有统计学差异(P<0.01),AKT1的基因(蛋白)表达量随菟丝草给药剂量的增加而增加,且中、高剂量组的变化具有统计学差异(P<0.01)。
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