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鸡β-防御素是一种富含半胱氨酸的小分子多肽，因其具有抗菌谱广、抗菌机制特殊、无残留等特点，在畜牧业中具有广阔的应用前景。鸡β-防御素-2（AvBD2）是鸡源抗菌肽中的一种，主要分布于骨髓和肺中，对病原微生物具有较强的杀伤作用。本研究以鸡AvBD2为研究对象，参考大肠杆菌偏爱密码子，人工合成AvBD2成熟肽基因，并构建克隆载体和表达载体，IPTG诱导表达融合蛋白GST-AvBD2，从诱导温度和诱导物浓度两方面对诱导条件进行优化，并初步研究了纯化后蛋白的抑菌活性。具体内容和结果如下：1鸡β-防御素-2成熟肽基因的设计与合成根据Genbank公布的鸡β-防御素-2成熟肽基因序列，参考大肠杆菌偏爱密码子，设计并合成大肠杆菌偏爱性鸡β-防御素-2成熟肽基因序列（AvBD2op），序列两端分别添加BamHI和EcoRI酶切位点，并构建克隆载体pMD18-Tsimple-AvBD2op；同时人工合成鸡β-防御素-2成熟肽基因序列AvBD2，序列两端分别添加NotI和EcoRI酶切位点，并构建克隆载体pMD18-Tsimple-AvBD2。2鸡β-防御素-2融合蛋白的表达与纯化鸡AvBD2成熟肽片段、密码子优化后成熟肽片段AvBD2op和pGEX-6P-1空载体双酶切后连接，构建表达载体pGEX-6P-1-Gal2和pGEX-6P-1-Gal2op，并分别转化至大肠杆菌BL21，培养PCR鉴定的阳性转化子后提取质粒测序，经BLAST比对，构建的表达载体中成熟肽片段的同源性为100％。挑取阳性克隆培养至对数期，加IPTG进行诱导表达，经SDS-PAGE电泳发现表达的融合蛋白分子量约为30kD。表达重组子在20℃经0.5mmol/L IPTG诱导5h后可溶性融合蛋白得到最佳表达。用GST纯化树脂纯化可溶性融合蛋白后得到单一条带，BCA法测定纯化后的蛋白浓度，结果显示密码子优化株的蛋白表达量有较大程度的提高。3鸡β-防御素-2融合蛋白抑菌活性的研究用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表达产物体外抑菌活性，结果显示GST-AvBD2融合蛋白对粪肠球菌（ATCC29212）、鸡白痢沙门氏菌（S2）、大肠杆菌（CMCC44102）及金黄色葡萄球菌（ATCC25923）均有抑菌活性。GST-AvBD2融合蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25~125μg/mL。透射电镜观察发现，融合蛋白作用后可引起病原菌菌体变形，菌体细胞破裂，细胞内容物大量外泄，菌体成为不规则残片。以上研究表明，本研究成功的运用人工合成技术构建AvBD2成熟肽密码子优化基因的原核表达载体；IPTG诱导并纯化出目的融合蛋白，初步摸索可溶性融合蛋白诱导的最佳条件为20℃，0.5mmol/L IPTG；抑菌活性研究表明纯化蛋白对多种菌具有抑菌作用，对细菌的形态结构有明显的损伤作用。本研究为鸡β-防御素-2基因工程新制剂的生产和应用奠定了基础。