肠缺血-再灌注(Ischemiareperfusion,IR)损伤是许多疾病中的常见病理生理过程，如肠系膜血管闭塞、体外心肺转流、失血性休克、肝脏和小肠移植等，约占机体器官缺血-再灌注损伤中的1/3，是全身炎症反应和多器官衰竭发生的重要原因，具有较高的致残率和死亡率。因此，如何减轻肠缺血-再灌注损伤过程中的多脏器损害，有效降低由此引起的死亡率成为临床亟待解决的课题。　　 肠缺血-再灌注损伤诱发肠损伤，乃至多器官功能障碍综合征(MODS)的病理生理机制目前尚未完全阐明，近年来，我们和其他学者的研究发现，肠缺血-再灌注后肠粘膜肥大细胞(Intestinalmucosalmastcells，IMMC)明显增加和脱颗粒，其作用有待进一步明确。　　 肥大细胞广泛分布于皮肤、淋巴组织、子宫、膀胱以及呼吸道和消化道粘膜下层结缔组织中的毛细血管及淋巴管周围。既往研究多集中于肥大细胞在变态反应中的作用。随着认识的不断深入，研究证实肠粘膜肥大细胞在维持肠道功能及肠粘膜屏障功能中起关键作用。　　 我们以往研究发现，通过干预肥大脱颗粒能够改变肠缺血再灌注损伤大鼠长期存活率。但由于检测的组织是动物恢复期，因此，与死亡有关的原因我们仍不清楚。本研究将通过复制大鼠肠缺血-再灌注损伤的早期动物模型，研究抑制和促进肥大细胞脱颗粒对肠缺血-再灌注过程中肠损伤的影响，并从氧化损伤、细胞因子和NO等途径探讨肥大细胞脱颗粒与早期肠缺血再灌注损伤的关系。　　 资料与方法　　 1动物模型建立6组大鼠均于术前16h禁食，自由饮水。腹腔注射10％水合氯醛3.5ml/kg麻醉后，仰卧位固定，消毒铺巾，腹部正中切口进腹，分离肠系膜上动脉。S组只分离肠系膜上动脉，不阻断；M、C、CP、P、K组用无损伤动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部，75min后松开动脉夹(我们在前期实验中发现肠系膜上动脉阻断75min术后七天的死亡率为41.6％)。模型复制成功的标准为缺血处肠系膜微动脉搏动消失；且再灌注前肠道淤黑、肿胀；动脉夹松开后缺血处肠系膜微动脉恢复搏动。C、CP组分别在再灌注前5min经尾静脉注射色甘酸钠25mg/kg和Compound48/800.75mg/kg；P、K组分别在再灌注前5min经尾静脉注射鱼精蛋白2.5mg/kg和酮替芬1mg/kg；S、M组分别给予等量生理盐水。　　 2标本处理及指标检测：　　 2.1小肠组织病理及免疫组化检测分别在再灌注后4h取1cm小肠(距回肠末端5cm)标本，用10％的甲醛固定，用于小肠粘膜光镜病理观察及免疫组化检测肥大细胞类胰蛋白酶表达。　　 2.2小肠组织匀浆及介质测定取大鼠取20cm小肠(距回肠末端5cm开始)，以冷生理盐水冲洗肠腔，滤纸吸干后置于-70℃冰箱中储存。检测各介质表达时将大鼠小肠标本由-70℃冰箱中取出，置于冰上解融。冷生理盐水冲洗肠腔后，以滤纸吸干后取小肠组织150mg，制作小肠组织匀浆。以4000r/min.离心15min。取上清液以BCA法测定组织总蛋白浓度。　　 3统计分析　　 所有数据均采用SPSS12.0软件处理。对数据进行正态性检验、方差齐性检验。正态分布的计量资料以均数±标准差((-x)±s)表示，组间比较采用方差分析进行分析。Chiu's评分、类胰蛋白酶、组胺、MDA、SOD、NO、细胞因子等检测值之间的关联采用Pearson相关分析；以P＜0.05表示差异有统计学意义。　　 结果　　 1一般资料　　 各组大鼠的体重、体表面积等一般情况类似，无显著差别(P＞0.05)。　　 2肠粘膜光镜病理变化　　 2.1病理变化：S组粘膜上皮细胞结构完整，排列整齐；M组、CP组表现为上皮下间隙的扩大，绒毛上皮和固有层的中度分离，部分绒毛顶端上皮层的破损及绒毛顶端出血；K组、C组及P组表现为肠粘膜改变以绒毛顶端的部分破坏为主，伴有部分上皮层同固有层分离。　　 2.2肠粘膜病理Chiu's评分：　　 ①与S组相比，其余各组的Chiu's评分均明显增高(P＜0.05)；　　 ②与M组相比，S、C、P、K组的Chiu's评分明显降低(P＜0.05)，而CP组的Chiu's评分无明显差别(P＞0.05)；　　 ③与CP组对比，S、C、P、K组的Chiu's评分明显降低(P＜0.05)，而M组的Chiu's评分无明显差别(P＞0.05)；　　 ④C、P、K三组之间的Chiu's评分无明显差别(P＞0.05)。　　 3肥大细胞计数和类胰蛋白酶表达　　 3.1IMMC计数。　　 3.2类胰蛋白酶表达　　 4小肠组织匀浆各指标检测　　 5相关分析　　 结论　　 1、肠粘膜肥大细胞(IMMC)在肠缺血再灌注损伤中起着重要的作用。　　 2、应用色甘酸钠、酮替芬和类胰蛋白酶抑制剂抑制肥大细胞脱颗粒，能够稳定IMMC活性，减轻肠缺血再灌注肠粘膜损害。　　 3、应用Compound48/80促进肥大细胞脱颗粒，可加剧IMMC活化脱颗粒，加重肠缺血再灌注肠粘膜损害。　　 4、肥大细胞脱颗粒物质中组胺和类胰蛋白酶直接参与了肠缺血再灌注损伤。　　 5、肥大细胞脱颗粒促进了肠氧化损伤，可能是其加重肠缺血再灌注损伤的机制之一。　　 6、肥大细胞脱颗粒促进了TNF-α和IL-8的产生，可能是其加重肠缺血再灌注损伤的机制之一。　　 7、肥大细胞脱颗粒促进了NO的产生，可能是其加重肠缺血再灌注损伤的机制之一。