传染性支气管炎病毒WBL株分离鉴定及全基因组序列分析

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鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡染性支气管炎病毒(Infectious bronchitisvirus,IBV)引起鸡的一种高度接触性的急性传染性疾病。由于IBV的基因组插入、突变、缺失和重组(包括不同毒株基因组)等,使IBV变异,给IB防治造成很大困难。为及时关注鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分子生物学特征及其变异情况,本研究对云南某鸡场送检的病料进行病毒分离、纯化,获得一株IBV-WBL毒株,并对其进行鉴定、全序列测定及分析。通过血凝试验、鸡胚矮小化实验、NDV干扰试验、RT-PCR鉴定、动物回归试验对IBV-WBL株进行初步鉴定。结果表明:血凝试验中IBV-WBL株对鸡红细胞不凝集;鸡胚矮小化实验中,死亡鸡胚胚体出现严重出血、紧脏肿大,剖检接毒7天后未死亡鸡胚出现胚体出血、卷曲胚、侏儒胚现象,部分出现白色尿酸盐沉积;NDV干扰试验中鸡胚尿囊液血凝价与仅接种NDV IV系活疫苗的对照组HA效价结果相差4个点;动物回归中fIBV-WBL株主要引起发病鸡肾脏肿大、尿酸盐代谢障碍,造成7日龄SPF雏鸡100%发病,50%死亡。通过设计24对引物对IBV-WBL株全基因进行克隆、测序、分析,结果表明:IBV-WBL株全基因长度(不包括PolyA)为27651nt,共编码6个ORF;全基因比对中IBV-WBL株与国内分离株全基因相似性在86.2%~94.7%之间;S1基因比对中WBL株与主要参考毒株相似性为65.6%~86.9%,与国内常用疫苗毒株(H120、4/91、LDT3、YX10-D90)的相似性为78%--85.2%,.与参考毒株不类聚,与其他大陆地区分离株进化距离较远,其他结构蛋白基因S2、E、M、N与国内参考毒株聚类;Simplot重组分析中IBV-WBL株S1基因1-750nt与TW Ⅰ型代表毒株TW2575/98相似度95%,与4/91疫苗株相似度低于75%,750-1620nt与4/91疫苗株相似度高于98%,与TW2575/98相似度低于80%,与主要疫苗毒株(H120,LDT3)差异较大。结果说明IBV-WBL毒株的S1基因变异较大,与当前流行毒株和疫苗毒不类聚,S1基因为4/91型和TWI型毒株重组产生。
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