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目的:研究CTLA4-Ig和抗CD40L单抗早期干预对T细胞活化的作用,探讨阻断CD28-B7、CD40-CD40L共刺激信号通路对自身免疫性心肌炎发生发展的影响及其机制。方法:60只Balb/C雄性小鼠随机分成两组:(1)实验组50只;于实验第1、8天给予皮下注射猪心肌肌球蛋白和CFA混合乳化液诱导制备EAM动物模型,并进一步分5个亚组:EAM对照组、CTLA4-Ig组、抗CD40L单抗组、联合干预组及IgG对照组,每组10只。CTLA4-Ig组、抗CD40L单抗组分别于初次免疫的第1、2、3天按1mg/kg体重小鼠尾静脉注射CTLA4-Ig、抗CD40L单抗,联合干预组等量注射两者混合液,IgG对照组注射等量的小鼠IgG。(2)正常对照组10只;用PBS代替猪心肌肌球蛋白皮下注射。实验第21d眼球采血后留取心脏标本,HE染色观察心肌组织病理变化,血清Tn-I、CK-MB检测反映心肌损伤情况,免疫组化及RQ-PCR检测心肌CTLA4、CD40L及其mRNA的表达,RQ- PCR法检测心肌细胞因子IFN-γ及IL-4 mRNA表达变化,ELISA方法检测血清IFN-γ、IL-4水平。结果:1.动物生存情况正常对照组皮下免疫过程中死亡1只,其余小鼠全部存活。EAM对照组与IgG对照组小鼠体重生长缓慢,2-3W时甚至出现下降,其他各亚组体重无明显差异。2.心肌组织病理改变正常小鼠心肌细胞排列整齐,未见炎症细胞浸润。EAM对照组与IgG对照组小鼠组呈急性心肌炎表现,心肌组织广泛炎症细胞浸润,心肌细胞肥大变性,肌浆溶解断裂,炎症积分明显高于正常对照组(P<0.01)。免疫干预后小鼠心肌炎症浸润明显好转,炎症积分降低,CTLA4-Ig组、抗CD40L单抗组见灶性、局限性炎症细胞浸润,联合干预组仅见散在单个核细胞浸润,心肌炎症积分低于单一干预组(P<0.05),两单一干预组间无明显差异(P>0.05)。3.血清心肌损伤标志物检测EAM对照组与IgG对照组小鼠血清Tn-I、CK-MB水平显著高于正常对照组(P<0.01)。免疫干预后,血清Tn-I、CK-MB水平下降,联合干预组较单一干预组下降更为显著(P<0.05),两单一干预组间无明显差异(P>0.05)。4.心肌组织CTLA4、CD40L及其mRNA表达免疫组化显示EAM对照组及IgG对照组心肌广泛浸润的单个核细胞胞膜高表达CTLA4、CD40L,RQ-PCR反映其mRNA也显著升高,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫干预后,CTLA4、CD40L蛋白及mRNA水平均下降,联合干预组较单一干预组下降更为显著(P<0.05),两单一干预组间无明显差异(P>0.05),CTLA4、CD40L在心肌中的表达强度与炎症积分呈正相关。5.心肌细胞因子IFN-γ、IL-4 mRNA表达EAM对照组及IgG对照组小鼠,心肌IFN-γmRNA、IL-4 mRNA表达较正常对照组均明显升高(P<0.01),以Th1细胞因子IFN-γmRNA升高更为显著。两单一干预组Th1细胞因子IFN-γmRNA表达降低,Th2细胞因子IL-4 mRNA表达升高,而联合干预组IFN-γmRNA、IL-4 mRNA均明显受到抑制,二者的表达都降低。6.血清IFN-γ、IL-4水平EAM对照组及IgG对照组小鼠血清IFN-γ水平较正常对照组明显升高(P<0.01),IL-4水平无明显差异。免疫干预后,各干预组血清IFN-γ水平显著下调,IL-4水平则显著上调。联合干预组IFN-γ水平下降较单一干预组明显,IL-4水平各干预组间差异无统计学意义。结论:1.注射猪心肌肌球蛋白可成功诱导出小鼠实验性自身免疫性心肌炎。2.单一CTLA4-Ig或抗CD40L单抗及二者联合干预,均可减轻心肌炎症浸润,延缓心肌损伤,联合干预较单一干预效果更为显著。