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白芍七物颗粒是在中医辨证论治基础上,应用于治疗溃疡性结肠炎的中药复方,多年的临床实践证实疗效显著。前期基础实验研究也表明白芍七物颗粒对三硝基苯磺酸诱导的大鼠肠炎模型有治疗效果,并且是通过多种途径机制产生作用,但白芍七物颗粒对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠肠炎模型作用效果尚未报道。肠道先天免疫细胞中NLRP3炎性体信号通路异常激活在促进溃疡性结肠炎发生发展中充当重要角色,但白芍七物颗粒对NLRP3炎性体信号调控作用及机制尚未阐明。本课题组一直从事白芍七物颗粒治疗溃疡性结肠炎机制的基础研究。本研究在前期研究的基础上,探索白芍七物颗粒对小鼠肠炎模型的影响及对NLRP3炎性体信号调控作用和机制。本课题实验研究分为以下两个部分:第一部分,白芍七物颗粒对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型的影响目的:探讨白芍七物颗粒对DSS诱导的小鼠模型的治疗效果,以及对结肠组织中NLRP3炎性体信号相关基因和蛋白的影响。方法:35只C57BL/6雄性小鼠随机分为5组,正常对照组,DSS模型组,DSS+低剂量白芍七物组,DSS+中剂量白芍七物组,美沙拉嗪阳性对照组。小鼠自然饮用3.5%DSS溶液7天建立肠炎模型,模型成功后予药物灌胃干预7天后处死动物、采集标本检测。记录动物体重、结肠长度数据,结合结肠组织病理改变评价白芍七物颗粒治疗效果;免疫组化检测组织中NLRP3、CD68表达情况,RT-PCR和Western blot检测结肠组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、NF-k B、TLR-4等基因和蛋白表达水平,评价白芍七物颗粒对小鼠结肠组织中NLRP3炎性体信号激活的影响。结果:白芍七物颗粒能缓解DSS造模后引起的体重下降、结肠缩短和结肠组织损伤,与DSS模型组相比下调DSS诱导小鼠结肠组织中NLRP3炎性体中NLRP3、Caspase1、ASC、IL-1b基因和蛋白表达(P<0.05);下调与NLRP3炎性体激活相关的TLR4/NF-κB信号中TLR4、NF-κB基因和蛋白的表达(P<0.05)。第二部分,白芍七物颗粒含药血清对小鼠巨噬细胞NLRP3炎症体信号调控作用。目的:探讨白芍七物颗粒含药血清对脂多糖(LPS)和三磷酸腺苷(ATP)诱导激活小鼠巨噬细胞NLRP3炎性体信号的调控作用。方法:应用LPS和ATP连续刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞建立NLRP3炎性体信号激活炎症模型,应用CCK8试剂法筛选白芍七物颗粒含药血清浓度并观察其对LPS+ATP刺激后细胞增殖的影响;使用含药血清干预后,应用免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达,ELISA检测培养基中IL-1β水平;利用RT-PCR、Western blot检测细胞中NLRP3、Caspase1、IL-1β、TLR4、NF-κB基因与蛋白表达水平。结果:LPS和ATP刺激后能使细胞活化并抑制细胞增殖和激活NLRP3炎性体信号;白芍七物颗粒含药血清能拮抗LPS和ATP刺激后的细胞活化和增殖抑制,拮抗效果与含药血清浓度有关;与模型组相比,含药血清能减少培养基中炎症因子IL-1b水平(P<0.05);下调细胞中NLRP3、Caspase1、IL-1β、TLR4、NF-κB基因与蛋白表达水平(P<0.05)。结论:1、白芍七物颗粒对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型有治疗作用;白芍七物颗粒下调结肠组织中TLR4/NF-κB、NLRP3炎性体信号相关基因和蛋白表达是其作用机制。2、白芍七物颗粒含药血清能下调由LPS和ATP诱导的巨噬细胞TLR4/NF-κB/NLRP3炎性体信号活性。