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红螯螯虾是我国新兴的重要经济虾类。属于无脊椎动物,仅靠体表甲壳和肝胰腺来抵抗外来病原菌和病毒的侵害。研究表明,饲料中添加枯草芽孢杆菌可以激发水产动物的先天免疫力,从而提高抗病力。本研究通过饲喂含有不同浓度(1.5×10~6 CFU/g、1.5×10~7CFU/g、1.5×10~8 CFU/g)枯草芽孢杆菌的饲料,对比研究枯草芽孢杆菌对红螯螯虾生长和非特异免疫性能及肠道菌群的影响,以期能够得到系统的试验数据,为解决我国螯虾养殖中微生态制剂的使用提供参考和依据,在实现饲料中枯草芽孢杆菌添加科学化和使用准确化的同时,增加红螯螯虾健康养殖的相关基础研究。养殖试验选用体重0.45±0.05 g的红螯螯虾,随机分为四个处理组,每处理组设3个平行重复。分别用含PBS(对照组)、1.5×10~6 CFU/g、1.5×10~7 CFU/g、1.5×10~8 CFU/g枯草芽孢杆菌的饲料投喂45 d,养殖试验第15、30、45天时,对每尾虾测定体重。结果表明,随着养殖时间的增加,红螯螯虾的末重量和特定生长率均呈现先缓慢上升后显著上升的变化趋势,其中1.5×10~6 CFU/g试验组末重量和特定增长率最高,可知1.5×10~6CFU/g的添加量更有利于促进红螯螯虾的生长发育。在试验第45 d,分别从四个处理组中各随机取9尾幼虾,采集肝胰腺组织,测定肝胰腺中α-淀粉酶(α-AL)、胰蛋白酶、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力。分析结果显示:幼虾肝胰腺中α-淀粉酶和胰蛋白酶的活力在添加枯草芽孢杆菌后均显著上升,以1.5×10~6 CFU/g试验组的为最高;谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活力无明显变化;超氧化物歧化酶活力在饲喂枯草芽孢杆菌试验组显著高于对照组,以添加量为1.5×10~8 CFU/g浓度的试验组为最高。检测肝胰腺组织免疫相关基因的表达量变化,荧光定量分析结果显示:1.5×10~7 CFU/g和1.5×10~8 CFU/g试验组的ALF和SOD基因的表达量均极显著上调(P<0.01)。养殖试验的第15、30、45天时,分别从四个处理组的幼虾中随机取6尾,采集肠道内容物,进行肠道菌群宏基因组分析,结果显示:变形菌门为红螯螯虾肠道内最丰富的定植菌,且隶属α-变形菌纲的红杆菌科有成为枯草芽孢杆菌影响红螯螯虾的肠道微生物的指示菌科的潜在可能,而拟杆菌门、厚壁菌门和放线菌门的丰度在养殖的不同时期均有所提高,养殖前期气单胞菌属被抑制,但效果不显著。对三个时期的四个处理组的Chao1、ACE、Shannon、Simpson指数进行统计分析,并评估了红螯螯虾在不同时期、不同处理浓度下的肠道菌群多样性和丰富度;基于功能性PICRUSt预测,发现红螯螯虾肠道微生物菌群具有丰富的代谢功能,其中有45.28%为代谢类通路,在代谢类通路中,主要包括碳水化合物代谢(22.69%)、氨基酸代谢(20.38%)、能量代谢(9.71%),其中主要Level2层级功能通路有氨基酸代谢、能量代谢、碳水化合物代谢和疾病类通路。养殖试验结束后,各组再饲喂基础饲料一周,断料24 h后,各组剩余螯虾进行维氏气单胞菌试验室人工感染试验,试验分四个组,每组3个重复,每个重复10尾,每尾虾腹腔注射20μL浓度为1.5×10~7CFU/m L的维氏气单胞菌的PBS悬浊液。24 h后每个重复组采集3尾濒死虾,取肝胰腺组织,测定肝胰腺中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果显示:幼虾肝胰腺组织中超氧化物歧化酶的活力在攻毒24 h后试验组显著高于对照组(P<0.05),以1.5×10~7 CFU/g试验组最高;碱性磷酸酶、酸性磷酸酶活力在攻毒24 h后,1.5×10~7 CFU/g试验组均显著高于对照组(P<0.05)。利用荧光定量PCR技术析比较免疫相关基因的表达量差异,结果显示,1.5×10~6 CFU/g、1.5×10~7 CFU/g和1.5×10~8 CFU/g试验组的ALF基因表达量均极显著上调(P<0.01),1.5×10~6 CFU/g试验组SOD基因表达量显著上调(P<0.05),1.5×10~7CFU/g试验组SOD基因表达量极显著上调(P<0.01)。试验结果表明:在基础饲料中添加一定量的枯草芽孢杆菌,不仅可以显著促进红螯螯虾的生长发育,提高肠道菌群的丰富度和多样性;同时对抗病性和免疫力均具有显著影响,可以显著提高红螯螯虾对维氏气单胞菌的抵抗力。在养殖过程中,综合考虑成本等各种因素,建议以1.5×10~6CFU/g浓度的添加量为适。