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目的:长链非编码RNA DANCR(long noncoding RNA-differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,DANCR)在滑膜间充质干细胞向软骨细胞的分化、牙髓细胞的成牙质样分化、肝癌、前列腺癌、结肠癌中发挥作用。DANCR与肿瘤的发生,定植,肿瘤侵袭,转移,增殖,迁移,细胞凋亡,疾病进展和预后息息相关。但DANCR与乳腺癌相关性研究的报道很少,具体机制未阐明。本研究旨在探讨DANCR在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的生物学功能。方法:收集2017年5月至2018年11月在东南大学附属中大医院就诊,术前行超声引导下穿刺经2位有经验的病理科医生确诊为乳腺癌的26例患者的新鲜乳腺癌组织和配对的正常腺体组织,研究开始前均取得患者同意并签署知情同意书,研究相关内容经东南大学附属中大医院伦理部门审核并批准。所有患者术前未行放疗、化疗和靶向治疗,采用qRT-PCR检测DANCR在癌组织及正常乳腺组织中的表达水平,另选择不同分子亚型的乳腺癌细胞株:MCF-7(HR+,Her2-)、MDA-MB-231(HR-,Her2-)、SK-BR-3(HR-,Her2+)、MCF-10A(正常乳腺上皮细胞)作为研究对象,采用qRT-PCR法比较不同分子亚型乳腺癌细胞株中lncRNA DANCR的表达水平。通过慢病毒(shRNA)转染技术构建lncRNA DANCR敲降的MDA-MB-231细胞株及阴性对照组。采用qRT-PCR验证DANCR敲降效率。用MTT、Transwell检测DANCR敲降后细胞增殖及迁移能力的变化;用流式细胞技术检测DANCR敲降后细胞周期、凋亡的情况;用Western-blot检测DANCR敲降后MDA-MB-231细胞中细胞周期相关蛋白的表达。使用SPSS分析DANCR的表达水平与患者临床特征:年龄、肿瘤分期、组织学分级、Ki-67、激素受体状态之间的相关性。结果:1、通过qRT-PCR检测发现DANCR在乳腺癌组织中的表达水平高于正常乳腺组织中,P<0.05,差异具有统计学意义。2、通过qRT-PCR检测比较不同分子亚型乳腺癌细胞株中DANCR的表达水平,DANCR在细胞MDAMB-231(HR-,Her2-)、SK-BR-3(Her2+)细胞中的表达水平高于MCF-10A(正常乳腺上皮细胞),P<0.05,差异具有统计学意义。3、在MDA-MB-231细胞系中利用慢病毒(病毒序列为:381和766)转染敲降DANCR,检测到绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)信号表明成功构建DANCR敲降细胞株。采用qRT-PCR检测敲降细胞系中DANCR的表达水平,结果证实:与阴性对照组相比,DANCR在shRNA-381和shRNA-766中均明显下调,P<0.05,差异具有统计学意义。4、使用MTT检测敲降DANCR后对MDA-MB-231细胞增殖的影响,结果发现与阴性对照组相比,DANCR敲降后抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力,P<0.05,差异具有统计学意义。5、使用Transwell检测DANCR敲降后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化,与阴性对照组相比,DANCR敲降后抑制了MDA-MB-231细胞的迁移能力,P<0.05,差异具有统计学意义。6、使用流式细胞检测DANCR敲降后对细胞周期的影响,与阴性对照组(NC)相比,DANCR敲降细胞中G0/G1期细胞百分比显著增加,NC为34.2%,381为48.38%,766组为40.17%。7、流式细胞技术检测DANCR敲降后对细胞凋亡的影响,与阴性对照组相比,敲降DANCR对细胞凋亡没有显著的影响。8、采用Western-blot检测DANCR敲降后MDA-MB-231细胞中的周期相关蛋白表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,敲降DANCR后抑制了MDAMB-231细胞中Cyclin D1和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)的表达水平,P<0.05,差异具有统计学意义。9、为了进一步研究lncRNA DANCR与临床病理特征之间的相关性,我们将DANCR表达中值(1.344)作为截止值,将所有患者分为2组(DANCR高表达组和DANCR低表达组),分析DANCR与各种临床特征之间的相关性。在DANCR高表达组中,0%,31%和69%的患者分别为TNM I,II,III,而在DANCR低表达组中,比例为61%,31%和8%。在DANCR高表达组中,0%,54%,46%的患者分别为组织学1,2,3级,而在低DANCR组中,该比例分别为8%,38%和54%。此外,69%和23%的患者在DANCR高表达组和DANCR低表达组中分别为ER阴性。但是DANCR的表达与肿瘤的组织学分级,Ki-67及患者的年龄之间没有显著相关性,P>0.05,差异无统计学意义。结论:综合以上实验结果表明DANCR在乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中表达显著增加。慢病毒转染敲降DANCR后抑制TNBC细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力,并通过降低Cyclin D1和CDK4的表达诱导G0/G1期细胞周期阻滞。因此,本实验结果表明DANCR可以促进TNBC细胞的增殖和迁移。DANCR的表达水平与肿瘤分期、ER表达均具有相关性,表明DANCR可作为三阴性乳腺癌潜在的诊断标志物和治疗靶点。但是需要进一步的研究去揭示DANCR在乳腺癌发生发展中的分子机制。