紫花苜蓿镰刀菌根腐病病原鉴定及抗病种质资源的筛选

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紫花苜蓿(Medicago sativa L.)为多年生草本豆科植物,主根粗壮,根系发达,有较强的耐寒、耐旱和再生能力,是世界上最重要的牧草。苜蓿根腐病是一种重要的根部土传病,可对紫花苜蓿的各个生长时期造成危害。根腐病病发时,主根会发生腐烂,随着病情加重,腐烂部位逐渐发展到根冠部,致使叶片变黄脱落直至死亡。已报道的紫花苜蓿镰刀菌根腐病病原主要有尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)等菌种,但不同地区引起苜蓿根腐病病发的致病镰刀菌存在差异。为探明我国其他未报道地区引起苜蓿根腐病的病原及其致病性以及筛选不同抗性的种质材料进而用于遗传多样性分析和紫花苜蓿抗病性品种培育,本研究于2018年对内蒙古乌海的大面积栽培紫花苜蓿进行田间调查,分离了病原菌并进行鉴定,对来自国内外的83份苜蓿进行抗病性筛选,主要研究结果如下:采集疑似镰刀菌根腐病的病株带回实验室,在PSA等多种培养基上进行分离纯化,通过观察菌落形态,颜色,菌丝及大小分生孢子并结合分子生物学方法,克隆其ITS和TEF-1α序列,在NCBI和Fusarium-ID数据库上进行比对,从而确定病原菌名称。通过将分离的菌种回接到紫花苜蓿上确定其致病性。根据以上试验共分离鉴定出4种菌株,分别命名为22,28,17-2,50。结合形态学和分子学鉴定结果,22菌株为锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum),28菌株为尖孢镰刀菌(F.oxysporum),17-2菌株为木贼镰刀菌(Fusarium equiseti),50菌株为腐皮镰刀菌(F.solani)。其中28菌株孢子活性最好,致病性最强,治病率可达100%。初步认为该菌种为内蒙古乌海苜蓿地的主要致病菌。利用致病性最强的28菌株侵染83份不同国家地区的紫花苜蓿种质材料,评价其抗病性。试验采用水培法接种病原菌,14 d后测量植物株高、根长、地下生物量并计算病情指数。试验结果显示83份紫花苜蓿种质材料不同程度感病,对根腐病的抗性具有显著差异。其病情指数变化范围在12.5~70.83,根据病情指数共划分出4种不同抗性等级,分别是抗病材料、耐病材料、感病材料和高感材料。其中抗病材料共3份,耐病材料共38份,感病材料共31份,高感材料共11份。根据聚类分析83份紫花苜蓿材料可以大致分为3类,39份耐病材料,23份感病材料,21份高感材料。虽然部分材料与病情指数划分结果不是完全一致,但抗病材料与感病材料在聚类分析结果中能够被明显区分,其中“PAMPA”和“No.1377”利用不同分析方法都为抗病材料,“G13608”、“偏关”、“阳高”、“敖汉”、“狼山”、“甘农3号”、“北疆”、“CF030056”、“新牧2号”、“龙牧1号”共10种种质材料都为高感材料。
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