【摘 要】
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目的:研究下颌前移矫治器治疗OSA前后颏舌肌收缩功能的改善及PINK1（PTEN-induced putative kinase 1）/Parkin（E3 ubinquitin ligase s）信号通路介导的线粒体自噬在OSA兔颏舌肌损伤中的作用。探讨下颌前移矫治器（Mandibular Advancement Device,MAD）治疗OSA兔前后颏舌肌功能的变化及线粒体自噬在其中的作用机制。
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目的:研究下颌前移矫治器治疗OSA前后颏舌肌收缩功能的改善及PINK1（PTEN-induced putative kinase 1）/Parkin（E3 ubinquitin ligase s）信号通路介导的线粒体自噬在OSA兔颏舌肌损伤中的作用。探讨下颌前移矫治器（Mandibular Advancement Device,MAD）治疗OSA兔前后颏舌肌功能的变化及线粒体自噬在其中的作用机制。方法:1.分组:18只雄性新西兰大白兔被随机分为3组即:正常组、OSA组、MAD组,每组6只。2.动物建模及评判:全麻状态下对OSA组以及MAD组动物进形OSA模型建立,具体方法为:两组动物仰卧状态下,于动物软硬腭交界1.5cm处的软腭内注射医用透明质酸钠约2ml。之后,通过拍摄上气道锥形束CT（Cone beam Computer Tomography,CBCT）以及使用多导睡眠监测仪（Polysomnography,PSG）进行睡眠监测,来评判模型是否建立成功。建模成功后,通过对MAD组兔佩戴自凝树脂制作的下颌前移矫治器建立MAD模型,同样使用CBCT拍摄及PSG监测的方法进行矫治器效果评价。3.仰卧位睡眠:建模成功后,固定实验时间为每天上午,由专业人员对所有动物经口腔灌注10%的水合氯醛（5-6 ml/kg）,安抚入睡后,所有动物被安置于自制木盒中仰卧位睡眠约2-4 h,连续8周,期间密切观察动物的生命体征,防止因窒息导致动物死亡。4.体内颏舌肌收缩张力检测:动物仰卧位睡眠持续8周后,对动物行全身麻醉,手术分离并清晰暴露颏舌肌,本实验采用BL-420E+生物机能实验系统对三组兔颏舌肌行收缩张力检测,记录不同时间段（每间隔1分钟）各种单刺激刺激电压（5V、10V、30V）在频率为100Hz时肌肉单收缩时的收缩张力（单位:克）。5.标本采集及处理:取颏舌肌标本,置于PVC管中并放于液氮罐中冻存,之后转移至-80°冰箱中保存。采用蛋白免疫印迹染色法（Westrrn Blotting,WB）检测微管相关蛋白轻链3（microtubule associated protein light chain 3,LC3）LC3-I、LC3-I I、Beclin-1、PINK1、Parkin的表达水平。结果:1.睡眠状况:OSA组仰卧位睡眠过程中嘴唇发绀、呼吸暂停、打鼾、觉醒等气道阻塞典型症状明显;MAD组气道阻塞症状出现明显好转;正常组无气道阻塞症状、呼吸平稳。2.上气道CBCT测量结果:OSA组上气道矢状向直径、横截面积及总体积显示较MAD组及对照组明显减小,差异有统计学意义（P<0.05）;以上3项指标MAD组与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。3.PSG检测结果:与正常组、MAD相比,OSA组血氧饱和度（Oxygen saturation,Sa O2%）、最低血氧值（Lowest Oxygen saturation,LSa O2）下降,呼吸暂停低通气指数（Apnoea-hypopnea index,AHI）升高,差异有统计学意义（P<0.05）;以上3项指标MAD组与正常组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。4.颏舌肌收缩张力检测结果:分别使用5V、10V、30V电压刺激颏舌肌,OSA组颏舌肌收缩张力较正常组、MAD组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;经MAD治疗后,5V、10V电压刺激时颏舌肌收缩张力有增大趋势,差异无统计学意义（P>0.05）;经MAD治疗后,30V电压刺激时颏舌肌收缩张力明显增大,差异有统计学意义（P<0.05）。5.Western blot结果:OSA组颏舌肌自噬相关蛋白LC3II/LC3I比值及Beclin-1、PINK1、Parkin蛋白表达水平较正常组、MAD组表达明显。结论:1.OSA兔颏舌肌收缩张力降低,经MAD治疗后颏舌肌收缩张力有增大趋势。2.OSA兔体内低氧环境激活了颏舌肌组织中PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬并调控相关自噬蛋白LC3II/LC3I、Beclin-1的高水平表达,从而导致颏舌肌功能损伤。3.MAD可有效缓解OSA导致的体内低氧环境,从而抑制颏舌肌组织中PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬,进而发挥保护颏舌肌的功能。
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