1型鸭圆环病毒间接ELISA方法的建立及流行病学调查

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鸭圆环病毒(Duck circovirus, DuCV)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的成员之一,是一类没有囊膜的单链环状DNA病毒。自2003年在德国由Hattermann首次报道以来,相继在匈牙利、美国、中国台湾及中国大陆等地发现或报道。本研究建立了1型鸭圆环病毒间接ELISA检测方法,并对2011年山东省潍坊和泰安两个主要养鸭地区健康肉鸭群中DuCV的流行和分布情况,进行了血清学调查。研究共分为三部分:1、检测基因1型DuCV抗体的间接ELISA方法的建立及血清学调查本研究建立了检测基因1型DuCV抗体的间接ELISA方法。采用PCR技术,扩增1型DuCV部分Cap基因,构建原核表达质粒pET-32a(+)-Cap; IPTG诱导表达后以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并初步应用于临床检测。结果显示:基因1型DuCV Cap基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达;Western blot检测表明,表达的重组Cap蛋白能与鸭圆环阳性血清发生特异性反应;建立的间接ELISA方法的蛋白最佳包被量为800ng/孔,血清最佳稀释度为1:50,阳性的Cut-of值为0.324。以建立的间接ELISA方法进行山东省健康鸭群DuCV抗体检测结果表明,结果显示:肉鸭场的DuCV抗体个体阳性率在0.4%-78.125%,平均为33.80%(382/1130),群体阳性率为100%(17/17)。2、2011年山东部分地区肉鸭群基因2型DuCV血清学调查为了解2型DuCV在山东地区的流行情况,本研究采用实验室已经建立的2型鸭圆环病毒间接ELISA方法,对2011年山东省潍坊和泰安两个地区的17个肉鸭场1130份血清进行间接ELISA检测。结果显示:肉鸭场的DuCV抗体个体阳性率在2%-78%,平均为29.91%(338/1130),群体阳性率为100%(17/17)。潍坊地区的抗体阳性率(42.81%)明显高于泰安地区(17.73%),显示DuCV在老养殖区鸭群中污染更加严重。3、基因1型与2型DuCV共感染分析分析用检测基因1型和基因2型DuCV抗体的间接ELISA方法分别对山东潍坊、泰安地区的肉鸭群进行血清学检测结果,发现1型DuCV与2型DuCV的抗体符合率为80.7%。泰安地区两型均为阳性的鸭只数为63,占总体检测数的10.84%,潍坊地区,两型均为阳性的个体为23.50%,略高于泰安地区。统计发现基因1型和2型DuCV共感染的阳性率为16.99%,说明在山东省鸭群中存在比较严重的两种基因型DuCV共感染现象。
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