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目的探索兔脂肪干细胞分离和培养条件,和兔髓核细胞分离和培养条件；将脂肪干细胞和髓核细胞共同培养,探讨脂肪干细胞向髓核细胞分化的潜能,证实脂肪干细胞可以作为种子细胞用于组织工程髓核研究。方法取兔项背部皮下脂肪组织,采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法分离兔脂肪干细胞,进行培养,传代至第3代；取异体兔胸腰段髓核组织,采用0.25%Ⅱ型胶原酶消化法分离兔髓核细胞,进行培养。通过细胞计数,调整兔髓核细胞细胞浓度1×104/L,调整第3代脂肪干细胞细胞浓度1×106/L,将第3代兔脂肪干细胞与异体兔髓核细胞按1：1体积比例共同培养作为共同培养组；将同等量兔髓核细胞单纯培养作为单纯培养组。隔日对两组细胞生长情况通过倒置显微镜进行细胞形态学观察。通过甲苯胺蓝染色初步进行细胞髓核细胞鉴定。通过Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色观察髓核细胞状况,进一步髓核细细胞鉴定。通过RT-PCR技术测定Ⅱ型胶原mRNA和聚集蛋白多糖mRNA,测定Ⅱ型胶原mRNA和聚集蛋白多糖mRNA在3d、7d、14d、21d的表达量,比较分析共同培养后Ⅱ型胶原mRNA和聚集蛋白多糖mRNA的变化情况。结果兔脂肪组织采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法可很好获得脂肪干细胞,并且细胞能保持良好增殖活性；兔髓核组织采用0.25%Ⅱ型胶原酶消化法,获得髓核细胞能在一定时段内能保持良好增殖活性。脂肪干细胞与髓核细胞共同培养第14天,甲苯胺蓝染色：细胞核呈蓝色,胞浆呈紫红色,与单纯培养组细胞形态无明显差异。共同培养组细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色呈阳性,表现髓核细胞特性：细胞核几乎不着色,胞浆着色,靠近核周明显,并可见颗粒状物质。共同培养组Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞明显多于单纯培养组。共同培养组聚集蛋白多糖mRNA及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量均明显高于单纯培养组。两组聚集蛋白多糖mRNA表达量比较,t=3.436,P<0.05；两组Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量比较,t=-2.733,P<0.05,差异有统计学意义。结论采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法和0.25%Ⅱ型胶原酶消化法分别是获得脂肪干细胞和髓核细胞的有效方法。共同培养组细胞甲苯胺蓝染色细胞核呈蓝色,胞浆呈紫红色,表现为髓核样细胞特性；Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学染色呈阳性,表现为髓核样细胞特性。通过RT-PCR测定Ⅱ型胶原rnRNA和聚集蛋白多糖mRNA,共同培养组明显高于单纯培养组,表明共同培养组细胞表现为髓核细胞特性,脂肪干细胞向髓核样细胞分化,分泌Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白多糖较多。总之,实验表明共同培养组细胞兔脂肪干细胞具有向髓核细胞分化的潜能,在适当的培养条件下与兔髓核细胞共同培养可转化为髓核样细胞,同时能够促进髓核细胞生长。脂肪干细胞可作为种子细胞应用于组织工程髓核的再生研究,可进一步选择合适支架材料进行脂肪干细胞和髓核细胞共同培养的实验研究。