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宫颈癌是女性常见肿瘤之一,其发病率及死亡率均居女性肿瘤的前位。目前手术、化疗、放疗仍是宫颈癌的传统治疗方法。光动力治疗(photodynamic therapy PDT)是近年来快速发展起来的一种治疗肿瘤的新的辅助手段,其主要原理是利用内源性或外源性的光敏剂选择性的吸收并潴留于病变组织中,然后在特定波长的激光照射下激活光敏剂,产生大量具有细胞毒性的活性氧(ROS),从而达到使细胞或者组织死亡的目的。c-myc基因及人类染色体端粒RNA(hTERC)基因的过度表达在肿瘤的发生发展中起到重要的作用。大量研究均证实宫颈癌及其癌前病变中均存在c-myc及hTERC基因的扩增或过度表达。可促进诱导并稳定G-四联体形成的四甲基毗啶卟啉(5,10,15,20-tetra-(N-methyl-4-pyridyl)porphyrin TMPyP4)是一种新型的水溶性光敏剂,属于人工合成的四价阳离子卟啉化合物,并有报道其可抑制端粒酶的活性。本研究将探讨端粒酶抑制剂四甲基吡啶卟啉(TMPyP4)作为光敏剂介导的光动力治疗对体外培养的人宫颈癌hela及siha细胞的杀伤效应。并筛选出较为敏感的细胞。并观察TMPyP4-PDT对筛选出细胞c-myc、hTERC基因表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的机制。第一部分TMPyP4-PDT对宫颈癌hela、siha细胞杀伤效应的研究目的：探讨TMPyP4-PDT对体外培养的宫颈癌hela、siha细胞的杀伤作用。方法：选择人宫颈癌hela、siha细胞系作为实验研究对象,分为正常对照组(不加光敏剂也不照光)；单纯TMPyP4组(加光敏剂不照光)；单纯光照组(不加光敏剂,照光)；实验组(即加光敏剂又照光)。CCK-8法检测TMPyP4-PDT对人宫颈癌细胞hela、siha的抑制作用；结果：正常对照组,单纯TMPyP4组及单纯光照组对hela、siha细胞的增殖均无明显影响。TMPyP4-PDT组中,在同一药物浓度下,随着光照能量的加强,细胞的抑制率逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。同一激光能量组,当TMPyP4浓度在0-50μmol/L时,抑制率随着药物浓度的增加而呈上升趋势,各浓度之间的差异有统计学意义(P<0.05)；当TMPyP4浓度在50-100μmol/L时,抑制率差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。在相同激光剂量和TMPyP4浓度作用下,对hela细胞的抑制率高于对siha细胞的抑制率(P<0.05)。在本实验中,光敏剂TMPyP4浓度为50μmol/L,激光剂量8J/cm2是TMPyP4-PDT体外杀伤siha细胞较为理想的条件。在此条件下,siha细胞的IC50分别是8.158、14.693μmol/L,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TMPyP4-PDT对宫颈癌hela、siha细胞均有显著杀伤作用,该作用存在光敏剂浓度及能量依赖现象,并有饱和现象；宫颈癌hela、siha细胞对TMPyP4-PDT的敏感性不同,宫颈癌hela细胞较敏感。第二部分TMPyP4-PDT对宫颈癌hela细胞c-myc、hTERC表达的影响目的：探讨TMPyP4-PDT对宫颈癌hela细胞的抑制作用及对c-myc、hTERC表达的影响。方法：选取激光剂量为4J/m2。光镜下观察不同光敏剂浓度下细胞形态的变化；Annexin-V-FITC/PI双染试剂盒检测不同光敏剂浓度下细胞凋亡率；选取光敏剂浓度为20μmol/L, RT-PCR法测定宫颈癌细胞hela正常对照组及TMPyP4-PDT组干预6、12、24、48、72小时后原癌基因c-myc、人类染色体端粒酶基因hTERC的变化。结果：光镜下可观察到随着光敏剂浓度的增加,细胞逐步出现坏死和凋亡样改变。Annexin-V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞随着随着TMPyP4浓度的增加,细胞的凋亡率及坏死率均增加。RT-PCR法测定随着培养时间的延长c-myc mRNA hTERC mRNA的表达降低。结论：TMPyP4-PDT对体外培养的宫颈癌hela细胞有明显的杀伤作用,并能诱导其凋亡,具有光敏剂浓度的依赖性。其作用机制可能与降低c-myc、hTERC mRNA的表达有关。