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大豆猝死综合症,简称SDS,是世界大豆3个主产国——美国、巴西和阿根廷大豆上发生的一种较新的真菌病害,它分别由2种镰刀菌Fusarium virguliforme和Fusarium tucumaniae引致。近几年该病发生趋于严重,造成的损失可达100%。SDS是土传病害,病菌可在土壤中存活多年,可随大豆的贸易传入新的地区。中国是美国、巴西和阿根廷大豆的进口大国,为防止大豆猝死综合症病菌随进口的大豆传入中国,保护我国的大豆生产,本研究确立了大豆猝死综合症病菌的检测技术,并应用该技术对从几个口岸采集的土样进行了检测。 本研究采用PCNB选择性培养基进行土壤分离,SDS病原菌在PCNB上产生圆形白色菌落,菌落中心微隆,淡黄色,粉笔末状。将菌落转移至PDA培养基上继续培养,产生蓝色不规则菌落,气生菌丝少,这些菌落的特征可以作为鉴别SDS病原菌的一个重要指标。在显微镜下观察它们的孢子形态,F.virguliforme、F.tucumaniae和它们的近似种的差别很小,都能产生镰刀形的,有2-3个分隔的大分生孢子。 针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点,参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specific primer,ASP)的要求设计筛选了一对引物Fsg-α-1/6,能特异地扩增F.virguliforme,产生327bp的电泳条带。另外根据ITS区序列设计了一对通用引物Ful/2,能扩增F.virguliforme和F.phaseoli,产生452bp的电泳条带。并且在传统的AS-PCR基础上进行改进,引入Ful/2作为阳性质控引物,将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合,使鉴定的结果更加稳定可靠。另外在ITS2区设计了一对特异性引物,能特异性地扩增F.virguliforme,产生650bp左右的条带,进一步完善了SDS病原菌北美种的检测技术。 最后,应用该技术对从各口岸采集的土样进行检测,没有发现SDS病原菌。