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背景:慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)是血液系统恶性肿瘤,是种多能干细胞的克隆性骨髓增生性疾病,大部分含有致癌性BCR-ABL融合基因;K562是BCR-ABL阳性细胞系,是研究CML理想细胞模型。膜联蛋白A11(Annexin A11,ANXA11)是膜联蛋白家族的成员之一,其异常表达会影响癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性行为,其CML的研究中未见报道;ETV6为转录因子ETS家族成员,因其染色体易位产生致癌性融合基因,而在血液系统恶性肿瘤中被广泛研究,但其与CML相关性未见报道;mi RNA表达异常通过靶向肿瘤抑制基因或癌基因参与肿瘤发生发展,mi R-4521在肾癌、肺癌和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中低表达,其相关机制研究未见报道。本组实验结果表明mi R-4521在CML样本中低表达,过表达mi R-4521能够抑制K562细胞的恶性行为。目的:1.检测CML样本中ETV6、ANXA11的表达水平,分析ETV6与ANXA11、mi R-4521三者相关性;2.探究K562细胞株中ETV6与ANXA11、mi R-4521三者调控关系;3.研究ETV6下调对K562细胞恶性表型的影响及其分子机制。方法:1.q RT-PCR检测CML样本中ETV6、ANXA11的表达水平,分析ETV6与ANXA11、mi R-4521三者相关性;2.基因芯片结合生物信息学分析预测ETV6与ANXA11、mi R-4521三者调控关系;WB、免疫共沉淀(Co-IP)和染色质免疫共沉淀(Ch IP)实验检测K562细胞株中ETV6与ANXA11、mi R-4521三者调控关系;3.WB检测K562细胞中ETV6干扰效率;台盼蓝计数法和甲基纤维素细胞体外克隆形成实验检测ETV6下调对K562细胞增殖能力的影响;Transwell法检测ETV6下调后K562细胞迁移和侵袭能力的影响;q RT-PCR和WB检测ETV6敲降K562细胞中MMP-2,MMP-9,TIMP-1 m RNA和蛋白表达水平变化;结果:1.与Normal组相比,ETV6和ANXA11在CML初发患者样本中水平升高;在配对CML样本(初发-CR)中,与初发期相比,患者在完全缓解(CR)后其样本中ETV6和ANXA11水平回落;在CML初发患者样本中,ETV6与ANXA11二者之间呈正相关,而ETV6与mi R-4521水平显示负相关,ANXA11与mi R-4521水平变化有负相关性趋势。2.ANXA11与ETV6直接结合调控ETV6的表达,上调ETV6降低mi R-4521表达;ETV6与mi R-4521启动子区的结合,抑制其转录;3.转染si ETV6,降低ETV6水平;ETV6下调抑制K562细胞体外增殖和克隆形成能力,通过减弱MMP-2,MMP-9及升高TIMP-1 m RNA和蛋白表达,抑制K562细胞体外迁移和侵袭能力。结论:1.在CML初发患者样本中,ETV6和ANXA11水平升高,CR后表达均出现回落现象;CML患者样本中,ETV6与ANXA11水平变化正相关,ETV6与mi R-4521水平变化负相关,ANXA11与mi R-4521水平变化有负相关性趋势;2.ANXA11下调细胞株中ETV6表达降低,mi R-4521表达升高,ANXA11通过直接结合并调控ETV6的表达,ETV6通过与mi R-4521启动子区域的结合,抑制其转录;3.ETV6下调抑制K562细胞增殖和克隆形成能力,降低MMP-2,MMP-9及提高TIMP-1表达,进而抑制K562的迁移和侵袭能力。