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母禽的繁殖性能特别是产蛋率的高低主要取决于卵巢和卵泡的发育状况。家禽卵巢发育的研究成为了解禽类繁殖机能调控和提高家禽产蛋性能的理论基础。本实验以海兰鸡胚为材料,一方面研究了胚胎期左右侧卵巢不对称发育的现象,另一方面研究了卵巢中原始卵泡形成以及卵泡刺激素(FSH)对其发育的调节作用,提示激素对家禽早期卵巢和原始卵泡发育的调节作用。 1.鸡胚左右侧卵巢不对称发育的现象和卵巢发育的激素调节作用 本实验将不同发育时期的鸡胚卵巢进行左右侧形态组织结构的对比观察,以及免疫组化染色检测左右侧生殖细胞的增殖和凋亡情况。结果表明,鸡胚在E6.5 d性别分化后,左右侧卵巢开始出现不对称发育现象,随着胚龄的增大,左侧发育,右侧退化。从性腺尺寸来看,右侧比左侧明显要短小,到发育后期差异更明显。从E7.5 d到E14.5 d,右侧卵巢的长度和宽度几乎没有增长,而左侧卵巢,宽度长度增长明显,宽度由0.5 mm增长至约1.5 mm,长度由约2 mm增长至约4.2 mm。在性别分化前后,右侧卵巢生殖细胞的增殖率有所下降,左侧则上升。E8.5 d开始,右侧卵巢出现明显的空泡和孔隙结构,凋亡蛋白的染色实验可知,右侧卵巢凋亡的生殖细胞被挤到孔隙中。通过E3.5 d芳香化酶抑制剂(AI,来曲唑,0.1 mg/枚)处理鸡胚后,右侧卵巢的形态发生改变,它不退化,变得细长状,而左侧卵巢失去了皮质结构,两者都朝雄性睾丸方向发育,形成精细管结构。出壳后还影响左侧卵巢卵泡的形成,卵巢皮质有卵泡结构,髓质有精细管结构,卵泡和精细管同时存在;右侧则完全发育成睾丸结构,只有非常明显的精细管结构,所以右侧卵巢更容易受到AI的影响。综上所述,鸡胚右侧卵巢从性别分化后开始退化,左侧发育成皮质和髓质,右侧卵巢通过生殖细胞增殖率下降,细胞凋亡来完成退化过程。然而芳香化酶抑制剂处理鸡胚,抑制了雌激素的合成,从而改变左右侧卵巢的发育,使卵巢朝睾丸方向发育,但是右侧卵巢比左侧卵巢更容易改变发育,形成睾丸结构。出壳后也影响了左侧卵巢卵泡的形成,形成卵睾体,而右侧卵巢发育成睾丸结构,反转比左侧更彻底,从而也验证了卵巢的发育受到激素的调控作用。 2.鸡原始卵泡的形成及其激素调节 本实验研究了新出壳雏鸡原始卵泡的形成过程以及FSH对其形成的调节作用。通过出壳后一周雏鸡连续切片的HE染色观察,结果表明,鸡原始卵泡的发生在出壳后3~4 d,继而向初级卵泡和次级卵泡发育。在出壳后一周到两周是原始卵泡启动发育的快速时期。钙黏蛋白N和E在出壳后2d和3d的雏鸡卵巢内表达量明显比其他时期高。添加FSH体外培养出壳后3d卵巢,结果发现0.025μg/mlFSH能促进钙黏蛋白表达。以上结果表明,鸡原始卵泡的发生在出壳后3~4 d,卵母细胞簇破裂,卵母细胞与周围体细胞相互作用,形成原始卵泡。钙黏蛋白在原始卵泡的形成前表达量有所上升,这表明与原始卵泡的形成有一定的关系。体外培养实验证明FSH可能通过调节钙黏蛋白的表达来影响鸡原始卵泡的形成。 本实验通过性反转模型,改变右侧卵巢发育,抑制了其退化,从而研究了激素改变对左右侧卵巢的不同影响,我们发现右侧卵巢比左侧卵巢更容易反转成睾丸。此外,我们还描述了鸡原始卵泡的形成过程以及组装机制的初步探索,我们发现FSH和钙黏蛋白与鸡原始卵泡的形成有关,FSH可能通过上调钙黏蛋白E的表达来促进原始卵泡的形成。这些结果为进一步了解禽类卵巢的发育调控和提高家禽产蛋性能提供了理论基础。