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背景与目的:皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC)是一种皮肤恶性肿瘤,起源于表皮或附属器的角质形成细胞。发病部位多出现在皮肤暴露处,也可转移至全身多个器官,带来致命威胁。CSCC的病因复杂、误诊率高、转移复发力强,近年的发病率逐渐升高。目前CSCC的治疗以手术切除为主,但常伴随术后复发或转移。因此针对不能手术和出现复发转移的患者,还需要探索更合适的治疗方案。近年来研究发现,靶向治疗在CSCC治疗中具有可观的临床应用价值,因此寻找精准的靶点和靶向CSCC的新药物有重要意义。上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)指的是上皮细胞在生理或病理情况下转变成具有间充质细胞特点的现象,表现为细胞之间的黏附性降低,紧密结构破坏,同时细胞极性丢失,运动能力增强。伴随着上皮标志物E-Cadherin表达的减弱、间质标志物N-cadherin、Vimentin表达的增强和转录因子Snail的激活,是恶性肿瘤发生发展中的关键环节,也是促进肿瘤侵袭和转移的主要原因之一。蛋白质乙酰化是一种普遍存在的、可逆、可高度调控的蛋白质翻译后修饰,由组蛋白乙酰基转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)来共同调节。HDACs异常表达能导致基因异常表达,与肿瘤的生长、侵袭和转移等密切相关,HDAC3是去乙酰化酶家族的一种,在多种恶性肿瘤中高表达,有望成为治疗肿瘤的靶点。乙酰化修饰除了对组蛋白有调节作用,对非组蛋白功能也有重要的调节作用。C-Jun是一种调控细胞分化、增殖的原癌基因,c-Jun高表达可诱导细胞的恶性转化,还可以诱导肿瘤细胞EMT现象,在肿瘤形成、发展和转移中发挥重要的作用。目前的研究表明,一些去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)可通过抑制非组蛋白的去乙酰化,有效的抑制肿瘤细胞生理活动,部分药物已经在临床中得到了很好的应用。人参皂苷20(R)-Rg3是从传统中药人参中提取的有效单体,研究发现Rg3具有低毒、高效的抗肿瘤作用,包括抗肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、黑色素瘤等。目前,以Rg3为主要成分的参一胶囊已被中国食品药物管理局批准用于临床多种恶性肿瘤的辅助治疗。而Rg3对CSCC的抗癌效果还尚不清楚,因此探索Rg3对CSCC的治疗价值及其机制研究具有重要的临床意义。在本研究通过Rg3对HDAC3表达及c-Jun乙酰化水平调节的探究,分析Rg3对CSCC细胞EMT及迁移能力的研究机制,为Rg3在临床中可以作为一个潜在的HDAC3抑制剂,治疗CSCC提供一定的科学依据。方法:1.使用西安艾莉娜生物科技有限公司的皮肤组织芯片SK483,采用免疫组织化学分析组织芯片中8例正常人皮肤组织和40例CSCC组织中HDAC3表达情况;2.利用CCK-8的方法检测Rg3对人CSCC细胞活性的影响及最佳实验浓度;3.采用脂质体瞬时转染技术将HDAC3的sh RNA转染至人CSCC细胞中,下调HDAC3的表达;将c-Jun的c DNA转染至人CSCC细胞中,增加c-Jun在人CSCC细胞中表达;4.采用Real-time PCR的方法检测HDAC3、E-Cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail的基因表达;5.采用Western blot的方法检测HDAC3、c-Jun、E-Cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail的蛋白表达;6.采用免疫荧光的方法检测HDAC3、E-Cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail的定位和表达情况;7.采用细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移能力;8.采用免疫共沉淀(IP)和Western blot检测c-Jun和c-Jun乙酰化表达情况。1.HDAC3在人CSCC组织中高表达,而在正常皮肤组织表达较低;2.Rg3抑制人CSCC细胞EMT和迁移能力;3.Rg3降低CSCC细胞中HDAC3表达;4.下调HDAC3表达可抑制人CSCC细胞EMT和迁移能力;5.下调HDAC3表达抑制人CSCC细胞EMT通过增加c-Jun乙酰化;6.Rg3下调HDAC3抑制人CSCC细胞EMT。结果结论1.HDAC3在人CSCC中异常高表达,Rg3可抑制HDAC3表达;2.Rg3能抑制人CSCC细胞EMT和迁移能力;3.下调HDAC3表达可通过增加c-Jun乙酰化,抑制人CSCC细胞EMT;4.Rg3是抑制HDAC3治疗人CSCC转移的潜在药物。