芒果苷对SHR T淋巴细胞亚群和炎性因子的影响及其寒热药性的研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:justinviva
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目的:高血压是一种多种因素综合的慢性疾病,其发病过程中伴随低度炎症性反应。以经典高血压动物模型自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat,SHR)为研究载体,采用传统药理学、分子生物学等评价方法,从血流动力学、行为学、宏观表征、微观理化和细胞学等多方面多角度多层次的评价芒果苷的药效;通过观察SHR外周血和肾脏T淋巴细胞亚群的比例变化和炎症因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-6、IL-10、γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平表达的影响,探讨芒果苷对高血压T淋巴细胞亚群和炎症相关因子的变化以及细胞免疫调节的作用机制,为芒果苷抗高血压病提供科学理论依据。根据细胞学的方法,辨别芒果苷的寒热药性有进一步的认识。方法:将40只健康的10周龄SHR大鼠随机分为5组:模型组、苯那普利组(10 mg·kg-1·d-1)、芒果苷低剂量组(25 mg·kg-1·d-1)、芒果苷中剂量组(50 mg·kg-1·d-1)、芒果苷高剂量组(100 mg·kg-1·d-1),每组8只;另设8只同龄的Wistar Kyoto大鼠(WKY)大鼠作为正常对照组,每天给药10 ml/kg连续灌胃,灌胃给药8周后停药,取材前禁食不禁水12h。1. 应用无创尾动脉法检测各组大鼠的血压。每两周测一次血压;并且每周称量一次大鼠的体质量;2. 应用流式细胞术检测苯那普利,芒果苷低、中、高剂量对自发性高血压大鼠外周血T淋巴细胞的影响。按照裂红法处理大鼠SHR和WKY的外周血,提取T淋巴细胞。用流式细胞仪进行检测,使用FCS express软件获取并分析数据,测定样本中的总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助淋巴细胞(CD3+CD4+)、T抑制淋巴细胞(CD3+CD8+)以及CD4+/CD8+的比值;3. 应用流式细胞术检测苯那普利,芒果苷低、中、高剂量对肾组织T淋巴细胞的影响。通过研磨法处理大鼠肾脏组织,并提取T淋巴细胞。用流式细胞仪进行检测,测定样本中的总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助淋巴细胞(CD3+CD4+)、T抑制淋巴细胞(CD3+CD8+)以及CD4+/CD8+的比值;4. 应用酶联免疫分析法(ELISA)法检测各组大鼠血清、、TNF-α的水平含量。根据试剂盒说明书检测其OD值;5.应用ELISA法检测各组大鼠肾匀浆、IFN-γ的水平含量。根据试剂盒说明书检测其OD值;6.每天观察大鼠的行为学,排便情况;7.应用MTT法检测芒果苷的寒热药性:观察各组大鼠含药血清对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)增殖作用的影响,设3个给药组(芒果苷低剂量组、芒果苷中剂量组、芒果苷高剂量组),一个空白对照组(高糖DMEM完全培养基)每组8个复孔。给药后,检测OD值。结果:1.大鼠体重的变化:空白组体重增加迅速,苯那普利组增加缓慢且幅度最小;2.各组大鼠血压的变化:灌胃8周后,与模型组比较,苯那普利组、芒果苷低、中、高剂量组收缩压(SBP)均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);3.流式细胞术检测发现:与模型组比较,苯那普利、芒果苷低、中剂量组外周血CD4+T/CD8+T比值均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01),芒果苷高剂量组外周血CD4+T/CD8+T比值明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,苯那普利组、芒果苷中剂量组肾脏的CD4+T/CD8+T比值降低,差异有统计学意义(P<0.01),芒果苷低、高剂量组和模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4. ELISA检测发现:与模型组比较,苯那普利组、芒果苷低、中剂量组的血清炎症因子IL-6水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);芒果苷高剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,给药组血清炎症因子IL-10水平均显著上调,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芒果苷中剂量组和芒果苷高剂量组的血清炎症因子TNF-α水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.01);苯那普利组、芒果苷低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,给药组肾脏中炎症因子IL-4水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,苯那普利组、芒果苷中、高剂量组的肾脏中炎症因子IFN-γ水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);芒果苷低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);5. 对行为学的影响:与给药前比较,苯那普利组、芒果苷低、中、高剂量组给药6周后SHR易激程度趋于稳定;6. 对宏观表征的影响:空白组大鼠出现小便清长、大便质地稀软、喜聚集、易静的症状;模型组大鼠出现易怒易躁、小便深黄、大便干硬的症状;苯那普利组、芒果苷低、中、高剂量组诸症随给药时间,小便渐清、大便渐软;7. MTT检测发现:芒果苷对HUVEC细胞的生长增殖表现出抑制作用,且在一定范围内,随着浓度增大抑制作用越强。结论:本实验结果表明高血压发生伴随着炎症反应,促炎因子释放增多,因此,芒果苷抑制T淋巴细胞参与的高血压炎症反应,调控T淋巴细胞亚群比例,减少促炎因子的产生,可以减轻血压升高的症状及靶器官损伤。芒果苷在中药寒热药性里归属于性寒凉的范围。
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