【摘 要】
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目前患肥胖且伴有糖尿病的人数日益增多,临床用于治疗肥胖糖尿病的有效方式大多通过药物和手术治疗,但往往会产生较大的副作用。如今随着肠道激素类药物的兴起,更多研究集中在此类药物上。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是由肠细胞分泌的可促进胰岛素合成、延缓胃排空的激素,瘦素（Leptin）是由ob基因编码、脂肪细胞分泌的可以控制摄食量、抑制脂肪合成的激素。目前GLP-1和Leptin只能通过注射方式给药,且
【基金项目】
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国家自然科学基金（31460699）; 海南自然科学基金创新研究团队项目（2017CXTD005）; 海南自然科学基金面上项目（317071）; 海南大学研究生教学经费（J100029019106004001）
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目前患肥胖且伴有糖尿病的人数日益增多,临床用于治疗肥胖糖尿病的有效方式大多通过药物和手术治疗,但往往会产生较大的副作用。如今随着肠道激素类药物的兴起,更多研究集中在此类药物上。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是由肠细胞分泌的可促进胰岛素合成、延缓胃排空的激素,瘦素（Leptin）是由ob基因编码、脂肪细胞分泌的可以控制摄食量、抑制脂肪合成的激素。目前GLP-1和Leptin只能通过注射方式给药,且价格昂贵,使得多数患者无法承受。乳酸菌作为人体益生菌,被认为是口服蛋白质类药物良好的递送载体。本试验首先利用乳酸乳球菌食品级表达系统表达GLP-1和Leptin,筛选出了一株具有潜在降血糖效果的副干酪乳杆菌,并构建完成肥胖且伴有糖尿病的动物模型。以下是研究内容和结果。本试验构建了重组质粒pNZ8148-glp-1和pNZ8148-ob后对乳酸乳球菌的电转化效率进行探究,结果显示,在培养基中加入2.5%甘氨酸、收集OD值为0.3的细胞、用文中配方Ⅰ（洗涤液Ⅰ:蔗糖0.5 moL·L-1+甘油10%;洗涤液Ⅱ:蔗糖0.5 moL·L-1+甘油10%+EDTA50mmoL·L-1）洗涤细胞,转入0.2μg质粒,利用2.5kV电压、0.2cm电击杯进行电击后培养1.5h后转化效率最高,达1.6×108 CFU·μg-1。转入至乳酸乳球菌后通过SDS-PAGE和Western Blot对蛋白表达进行检测,GLP-1和Leptin大小分别是18.9kDa、6.3kDa。此外,还发现重组蛋白经nisin诱导1h后,即便没有nisin的存在也能持续分泌7h。这为进一步工作奠定基础。乳杆菌可以有效抑制α-葡萄糖苷酶活性进而间接起到调节血糖的作用,本试验从发酵酸奶中分离出三株乳杆菌,目的是为了筛选出一株具有潜在降血糖功效的乳杆菌作为上述重组乳酸菌的辅助治疗菌株。本试验以对α-葡萄糖苷酶抑制率和模拟胃肠道耐受性为筛选条件进行研究,最终发现本实验中副干酪乳杆菌分离株对α-葡萄糖苷酶的抑制率较其余分离株高,达35.6%;该菌株在模拟胃肠道中的存活率也较其余分离株高。因此,该副干酪乳杆菌分离株和重组乳酸菌联合使用,在理论上可以进一步增强重组乳酸菌在降糖和治疗肥胖糖尿病的的生物活功能。本试验成功构建了高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,其体重、血糖和血脂明显高于正常饮食小鼠,从而为进一步构建重组乳酸菌和副干酪乳杆菌在体内的生物活性分析提供了必须的实验动物材料。
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