【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA（Lnc RNA）钙离子激活氯离子通道蛋白1反义RNA1（AN O1-AS1）对食管鳞癌细胞TE-1和EC109增殖及凋亡等生物学行为的影响及其可能的机制。方法:（1）用带有绿色荧光标签的沉默ANO1-AS1慢病毒及其对应的慢病毒空载体感染食管癌细胞TE-1和EC109,在荧光显微镜下观察慢病毒侵染效率,q RT-PCR检测沉默后ANO1-AS1表达情况并筛选成
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目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA（Lnc RNA）钙离子激活氯离子通道蛋白1反义RNA1（AN O1-AS1）对食管鳞癌细胞TE-1和EC109增殖及凋亡等生物学行为的影响及其可能的机制。方法:（1）用带有绿色荧光标签的沉默ANO1-AS1慢病毒及其对应的慢病毒空载体感染食管癌细胞TE-1和EC109,在荧光显微镜下观察慢病毒侵染效率,q RT-PCR检测沉默后ANO1-AS1表达情况并筛选成稳转细胞株;（2）Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验和平板克隆形成实验检测下调ANO1-AS1对食管鳞癌细胞增殖能力的影响并通过Western blot检测增殖细胞核抗原（PCNA）和抑癌基因p53蛋白的表达情况;流式细胞仪检测沉默ANO1-AS1对细胞周期的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白（Bax,Bcl-2,caspase3/9及其剪切体蛋白）的表达情况;（3）通过TIMER 2.0及GEPIA2数据库了解正义基因ANO1在食管癌中的表达情况,在UCSC数据库获取ANO1-AS1与ANO1在染色体上的位置关系;q RT-PCR和Western blot检测沉默ANO1-AS1后,ANO1 m RNA及蛋白表达变化;（4）利用Lined Omics数据库获取ANO1正相关表达基因集并通过富集分析工具对该基因集可能调节的信号通路进行富集;（5）通过Western blot检测ANO1-AS1可能调节通路中关键蛋白的磷酸化水平或表达情况。结果:（1）向食管鳞癌细胞TE-1及EC109中侵染沉默慢病毒后,实验组ANO1-AS1的表达量较对照组降低（P＜0.001）;（2）下调ANO1-AS1后,食管鳞癌细胞TE-1和EC109增殖活力和克隆形成能力下降,PCNA蛋白表达降低,p53蛋白表达增加,Bax及Cleaved cas-3/9蛋白表达增加,抑凋亡蛋白（Bcl-2）表达下降,细胞周期发生G0/G1期阻滞（P＜0.05）;（3）ANO1在食管癌组织中高表达;ANO1-AS1与ANO1均位于染色体11q13.3且ANO1-AS1转录本第2外显子与ANO1转录本第26外显子存在部分序列重叠;下调ANO1-AS1后,食管癌中高表达的ANO1的m RNA及蛋白表达均降低（P＜0.05）;（4）富集结果显示ANO1正相关表达基因集主要富集在“细胞周期通路”,“Wnt通路”,“PI3K/Akt通路”及“m TOR通路”等（FDR＜0.05）;（5）与对照组相比,下调ANO1-AS1表达水平,食管鳞癌细胞TE-1和EC109中“PI3K/Akt/m TOR”等通路关键分子的磷酸化水平或蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论:ANO1-AS1可能通过影响PI3K/Akt等通路活性促进食管鳞癌细胞的增殖并抑制其凋亡。
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