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研究背景胃癌是胃肠道肿瘤中最为常见的高死亡率癌症之一。随着早期筛查的普遍开展及人们对健康的日益重视,使得胃癌过去一个世纪中的发病率在全球范围内下降。我国近年的胃癌的早期诊断和治愈率都有提升;胃癌的发病率有所下降,这同样得益于我国卫生条件和医疗条件的改善。目前,手术根治性切除为该病重要治疗手段,并且指南里最新的证据均表明新辅助放化疗加手术治疗的方式,可以提高胃癌手术的治愈率,并降低肿瘤转移及复发率,促进预后改善。但是进展期和晚期胃癌,其死亡率并没有得到改善,转移是导致这种侵袭性疾病的复发率和死亡率增加主要原因。近年来,胃癌的靶向治疗给进展期和晚期胃癌的带来了更好的清除肿瘤效果及更长的生存期。现今关于靶向治疗的研究也是很多的研究的热点。多个研究表明P90核糖体蛋白S6激酶4(RSK4)在个别恶性肿瘤中具有抑制肿瘤作用。目前关于胃癌细胞中RSK4基因的蛋白表达情况及其对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭影响的相关研究则较为缺乏。我们的研究以胃癌细胞系为研究对象,探讨RSK4对人胃癌细胞生物学行为的影响。研究目的探析P90核糖体蛋白S6激酶4(RSK4)在人胃癌细胞株(GCCL)中的表达,及RSK4对人胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和在实体肿瘤中的生物学影响。研究意义通过研究检测RSK4在人胃癌细胞中的作用提供机制的实验依据。方法通过实验,筛选P90核糖体蛋白S6激酶4(RSK4)高表达的胃癌细胞系。使用携带siRSK4基因的Lipofectamine TM 2000转染试剂转染到所筛选的细胞系中,以建立具有敲除RSK4基因的胃癌细胞系。使用qRT-PCR和蛋白质印迹(WB)检测其中的RSK4基因敲除的效率。使用甲基噻唑四唑(MTT)检测转染后的胃癌细胞的增殖,流式细胞仪检测转染后细胞的周期与凋亡,并在化疗药物的抑瘤环境下实验细胞凋亡的差异,以及使用划痕和Transwell实验检测细胞如何的侵袭与迁移,最后使用荷瘤小鼠研究RSK4对皮下成瘤的影响。研究结果通过使用RT-qPCR和Western blot分析评估RSK4在胃癌细胞中的表达。从胃细胞株(Ges-1)和胃癌细胞系(SGC-7901,BGC-803、HGC-27)的四种细胞中,筛选RSK4高表达的BGC-803和HGC-27两种胃癌细胞系。使用携带siRSK4基因的LipofectamineTM 2000转染试剂转染到HGC-27和BGC-803细胞系中,以建立具有RSK4抑制表达的胃癌细胞系。qRT-PCR和蛋白质印迹(WB)分析证实了 HGC-27细胞系中的RSK4低表达,证实敲除RSK4有效。在实验组RSK4-siRNA转染后的HGC-27细胞系中RSK4表达比对照组的显著下调(P<0.001),MTT法检测转染siRSK4后的BGC-803和HGC-27人胃癌细胞系有显着增殖(P<0.001),PI流式细胞仪检测到G0/1期细胞减少以及S期细胞明显增多(P<0.05),Annexin/PI检测转染后细胞的凋亡率也比较控制组低(P<0.05),进一步加化疗药物检测显示实验组的胃癌细胞凋亡降低显著(P<0.005),划痕实验及Transwell检测显示,细胞的迁移能力及侵袭能力均显着增强(P<0.05)。结论实验转染RSK4-siRNA的胃癌细胞系,可使RSK4基因表达沉默,RSK表达降低可促进胃癌肿瘤细胞的生长和侵袭,减少癌细胞的凋亡。表明RSK4基因有抑制胃癌细胞的增殖及转移的作用,可能是一种潜在的肿瘤抑制基因,在胃癌治疗中可为新的靶向治疗的治疗靶点提供生物学依据。